低氧条件下280nm LED紫外线对SH-SY5Y细胞株增殖的影响及机制研究

发布时间：2020-11-06 18:37

　　 目的本实验的目的是试图通过在低氧状态下观察280nm LED-紫外线(Light Emitting Diode-Ultraviolet,LED-UV)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞株)的形态变化、增殖情况、细胞凋亡及Bcl-2基因的表达的影响,进一步探讨其发生机制,探索低毒、高效的体外净化方法,以期为体外净化提供理论依据。方法1.本实验以对数生长期的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞株)为研究对象,以280nm LED-UV为光源,用终浓度为150μmol/L的氯化钴(C_OCl_2)创建化学低氧细胞培养体系。2.将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和实验组(对照组A,实验组B、C、D三组):对照组A为未处理的细胞;实验组B为低氧组(用终浓度为150μmol/L的C_OCl_2处理后的细胞);实验组C为紫外线组(用剂量为30J/m~2的280nm LED-UV照射后的细胞);实验组D为低氧+紫外线组(在用终浓度为150μmol/L的C_OCl_2处理的基础上,加用剂量为30J/m~2的280nm LED-UV照射后的细胞)。3.将各组细胞加入等量含10%胎牛血清的DMEM/F-12培养基中,置于37℃、5%CO_2、饱和湿度的恒温培养箱中培养48h。4.用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞的形态变化、增殖情况,用CCK-8检测SH-SY5Y细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2基因的表达。结果1.SH-SY5Y细胞形态、密度变化:培养48h后,在倒置显微镜下观察细胞形态、计算细胞密度。对照组A细胞密度大,为(21.10±1.41)×10~4/ml,贴壁生长、排列整齐、形态完整,突起明显,胞浆丰富,细胞核大。与对照组A比较,实验组B-D细胞密度均明显减小(P均0.01),分别为(17.43±1.17)×10~4/ml、(6.83±0.76)×10~4/ml、(2.33±0.85)×10~4/ml,排列紊乱,部分细胞漂浮,突起回缩或断裂,胞体固缩,呈圆点状,网络消失,各组间的比较差异均有统计学意义(F=199.53,P均0.01)。实验组C、D均较B细胞密度减小,贴壁细胞减少,漂浮细胞增多,以实验组D最为显著,各实验组间的比较差异均有统计学意义(P均0.05)。2.SH-SY5Y细胞增殖抑制率:与对照组比较,实验组B-D组的增殖抑制率均明显升高(P均0.01),分别为(16.93±1.19)%、(67.93±7.35)%、(89.69±2.32)%,各组间的比较差异均有统计学意义(F=206.35,P均0.01)。实验组C、D增殖抑制率明显高于实验组B,以实验组D最为显著,各实验组间的比较差异均有统计学意义(P均0.05)。3.SH-SY5Y细胞凋亡率:对照组A细胞凋亡率为(4.41±0.31)%,与对照组比较,实验组B-D的细胞凋亡率均明显升高(P均0.01),分别为(9.10±0.32)%、(22.93±0.33)%、(25.33±0.55)%,各组间的比较差异均有统计学意义(F=2071.78,P均0.01)。实验组C、D凋亡率明显高于实验组B,实验组D最为显著,各实验组间的比较差异均有统计学意义(P均0.05)。4.SH-SY5Y细胞Bcl-2基因表达:与对照组比较,实验组B-D的Bcl-2表达量均明显降低(P均0.01),分别为(0.7073±0.0176)、(0.3987±0.0070)、(0.2137±0.0037),各组间的比较差异有统计学意义(F=1504.84,P均0.01)。实验组C、D的Bcl-2基因表达量低于实验组B,实验组D最为显著,各实验组间的比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论1.低氧、280nm LED-UV均能抑制SH-SY5Y细胞增殖、促进其凋亡,且280nm LED-UV对其增殖的抑制及促凋亡作用较低氧强,在低氧条件下的280nm LED-UV对SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用及促凋亡效果最显著。提示低氧、紫外线是通过促进SH-SY5Y细胞凋亡来抑制细胞增殖。2.低氧、280nm LED-UV均能下调SH-SY5Y细胞Bcl-2基因的表达,280nm LED-UV下调Bcl-2基因表达的作用比低氧强,在低氧条件下的280nm LED-UV对Bcl-2基因表达的下调作用最显著。提示Bcl-2基因表达减少可能是低氧条件下280nm LED-UV照射诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制之一。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.41
【部分图文】：

C 组（紫外线组） D 组（低氧+紫外线组）图 2 不同实验条件下 SH-SH5Y 细胞生长状态（×200 倍，培养 48h）SH-SY5Y 细胞增殖抑制率与对照组比较，实验组 B-D 组的增殖抑制率均明显升高（P 均<0.01），结果下，各组间的比较差异均有统计学意义（F=206.35，P 均<0.01）。实验组 C、D殖抑制率明显高于实验组 B，以实验组 D 最为显著，各实验组间的比较差异均有计学意义（P 均＜0.05）（见表 7、图 3）。表 7 不同实验条件下 SH-SY5Y 细胞增殖抑制率（%， X±SD）分组 处理方式 增殖抑制率（%， X±SD）B（低氧组） CoCl216.93±1.19aC（紫外线组） 30J/m267.93±7.35abD（低氧+紫外线组） 30J/m2+CoCl289.69±2.32abc

结果分 组凋亡率（%）对 照 组 低 氧 组 紫 外 线 组 低 氧 +紫 外 线 组01 02 03 0图 4 不同实验条件下 SH-SY5Y 细胞凋亡率
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本文编号：2873514