鱼藤酮诱导SH-SY5Y帕金森模型中对FOXO3a在自噬凋亡中作用的研究

发布时间：2020-12-10 09:28

　　背景帕金森病（PD）是全球散发的慢性神经退行性疾病。其病因多样,病理表现为脑内多巴胺能神经元细胞凋亡。残存细胞内路易小体为该疾病典型病理表现,始终为研究者重视。路易小体实际是神经元出现蛋白代谢功能异常后,自噬溶酶体内突触核蛋白等物质降解紊乱所遗留的一种特殊病理形式。细胞自噬的分子机制因与细胞的代谢、免疫、营养、应激及死亡等多种机制相关而备受关注。进一步研究中我们发现,因该疾病中多巴胺能神经元的特殊性,进行动物实验的诱导剂在相应细胞试验中较难复制出令人满意的自噬细胞模型。方法及结果:本研究者通过文献检索,首先通过不同浓度鱼藤酮对SH-SY5Y细胞进行不同时段诱导筛选,经荧光染色后镜下凋亡观察、流式细胞仪计数定量、细胞活性试验（CCK8法）验证,自噬诱导后蛋白测定、荧光染色观察、溶酶体抑制剂反向验证等多种实验手段,终选定以特定时长特定浓度鱼藤酮对SH-SY5Y细胞诱导,来进行下一步以自噬为中心目的的帕金森病早期的细胞分子生物学研究。在该细胞模型的进一步研究中,我们发现FOX03a蛋白作为一种复杂功能的转录因子,通过磷酸化能活动所致浆核间移动及转录的启动,调控下游因子在SH-SY5Y细胞的自... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２－１细胞在２０Ｘ目镜下?细胞在４０Ｘ目镜下??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?２０Ｘ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?４０Ｘ??

４）？加入５叫Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ，轻轻混匀。??５）．加入１００碘化丙啶染色液，轻轻混匀。??６）．室温（２０－２５°Ｃ）避光孵育１０－２０分钟，随后置于冰浴中。使用铝箔进行避??。孵育过程中重悬细胞２－３次以改善染色效果。然后以同法处理同一样本置??共荧光显微镜下检测：经ｌ〇〇〇ｇ离心５分钟，收集细胞，用５０－１００４??ｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ结合液轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。??３．３随即进行流式细胞仪检测，Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ为绿色荧光，碘化丙啶（ＰＩ）??红色焚光，??４试验结果：??４．１凋亡染色下镜下直接观察（因图像素材过多，仅展示较典型图像供观者??行定性参考）??建模前，根据镜下肉眼观察，了解ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞在鱼藤酮诱导下产生细??死亡。经荧光凋亡双染色试验，经荧光共聚焦显微镜拍摄（图２－２至图２－６）??

对照组(DMS}24H流式细胞仪各项数据


本文编号：2908465