糖酵解功能障碍在RSL3诱导脑胶质瘤细胞自噬性死亡中的作用及机制研究

发布时间：2021-01-12 09:46

　　背景:胶质瘤的治疗主要包括手术切除后联合术后放化疗,但由于胶质瘤恶性程度高且容易对化疗产生耐药性,它的预后仍然很差。因此,新的治疗策略有待开发。铁死亡（Ferroptosis）是一种新发现的非凋亡细胞死亡形式,其主要生化特征是铁依赖性的脂质活性氧的过度积累,诱导肿瘤细胞发生铁死亡是一种新的杀死肿瘤细胞的思路。近来的研究发现自噬在铁死亡的过程中发挥着重要作用。RSL3是一种通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）活性来诱导铁死亡的小分子化合物,已被报道可诱导多种肿瘤细胞死亡,但是RSL3对胶质瘤细胞的杀伤作用以及RSL3是否会导致胶质瘤细胞的自噬性死亡尚不清楚。肿瘤细胞以糖酵解作为主要的能量来源,诱导肿瘤细胞发生糖酵解功能障碍是杀死肿瘤细胞的策略之一。虽然已经有大量研究探讨了RSL3在铁死亡相关通路中的作用机制,但目前还不清楚RSL3是否对肿瘤细胞的糖酵解功能有影响。探讨RSL3引起胶质瘤细胞死亡的具体机制,有助于为其临床应用提供理论基础。目的:采用大鼠C6胶质瘤细胞,人U373、U87和U251胶质瘤细胞以及荷瘤裸鼠模型探讨RSL3能否诱导胶质瘤细胞自噬性死亡并探讨其发生机制。方法:1... 

【文章来源】： 王选重 吉林大学

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MTT检测结果表明RSL3以浓度依赖的方式抑制胶质瘤细胞活力Fig4.1MTTassayindicatedRSL3inhibitedtheviabilitiesofgliomacellsinadose-

第4章实验结果184.1.2RSL3诱导胶质瘤细胞死亡我们进一步使用LDH法来检测RSL3对胶质瘤细胞的细胞毒性，发现在U373、U87和U251胶质瘤细胞中,RSL3可明显诱导细胞死亡，而且随着RSL3浓度的升高，细胞的死亡率逐渐增加。因此，我们证实了RSL3对胶质瘤细胞有剂量依赖的细胞毒性。图4.2LDH释放试验证明RSL3以浓度依赖的方式诱导胶质瘤细胞死亡Fig4.2LDHreleaseassayshowedRSL3inducedgliomacelldeathinadose-dependentmanner.4.2RSL3诱导胶质瘤细胞发生自噬为了研究RSL3能否诱导胶质瘤细胞发生自噬，我们通过WesternBlotting的方法来分析RSL3处理后胶质瘤细胞内自噬相关蛋白的水平的变化，结果发现，随着RSL3浓度的升高，细胞内自噬标记蛋白beclin-1、ATG5、ATG12、LC3B水平逐渐提高，p62水平逐渐下降。我们用RPF-GFP-LC3慢病毒转染U87细胞以监测自噬流是否开放。与对照组相比,我们发现RSL3处理后细胞内红色和绿色的荧光点明显增多（图像融合后为黄色荧光点），这说明RSL3处理后细胞内自噬体合成明显增加。与此同时，在RSL3组中观察到了只发红色荧光而无绿色荧光的斑点(箭头所示),这是自噬

第4章实验结果19流开放的一个关键证据，因为在自噬体-溶酶体融合形成自噬溶酶体过程中，标记LC3的绿色荧光蛋白对溶酶体酸性微环境敏感性而会降解，使得自噬溶酶体只发红色荧光。因此，我们证明RSL3能够激活胶质瘤细胞发生自噬。图4.3WesternBlotting实验证实在RSL3浓度梯度样品中ATG5，ATG12，Beclin-1和LC3B蛋白水平增加，p62水平下降Fig4.3WesternBlottingassayprovedRSL3-inducedincreasingproteinlevelsofATG5,ATG12,Beclin-1,LC3Banddecreasingproteinlevelofp62.图4.4荧光显微镜显示RSL3处理后RPF-GFP-LC3慢病毒转染U87细胞内自噬


本文编号：2972631