缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马microRNAs表达谱的影响
发布时间：2021-04-01 02:08
目的探讨脑缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的病理生理影响及产生影响的机制,并利用基因芯片技术筛选在此过程中脑组织海马区差异表达的微小RNA（microRNA）,对表达差异显著的基因进行PCR结果验证,从基因组学层面解释脑缺血预处理对缺血再灌注损伤干预作用机制。方法本实验经评估选用雄性SD大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为3组,分别为脑缺血再灌注组（I/R组）、缺血预处理组（CIP组）和假手术组（Sham组）,每组24只,共72只。I/R组:采用Zea-Longa（改良）法缺血阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,予以阻断缺血2h后恢复灌注1d;CIP组:选用大脑中动脉二次线栓法制备缺血预处理模型,线栓予以短暂阻断大鼠右侧大脑中动脉10min,再灌注1d后,再次阻断血流,缺血2h,复灌1d;Sham组:空白对照组不予特殊处理,仅分离SD大鼠颈总动脉,不栓塞。术后大鼠清醒后,按照Zea-Longa评分标准对各组SD大鼠进行神经行为学评分;选取符合入组标准及评分标准的SD大鼠,各组选取缺血复灌1d的8只SD大鼠,麻醉后手术取脑,并置入脑模具制备脑切片,采用TTC（2,3...
【文章来源】： 陈静君 华北理工大学
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠编码顺序及位置
利插入线栓；（4）注意尽量避免损伤在颈内颈外分叉下的交感神经节；（5）血管入颅骨时有一个狭窄或角度，插入线栓时要手法轻柔并且遇阻力即停止，忌用力过猛损伤血管，避免插入过深刺破大脑中动脉；（6）线栓勿在血管内反复进退，否则易造成蛛网膜下腔出血，导致造模成功的假象；（7）插入线栓速度尽量快，避免时间长了血管内血栓形成，调整尼龙线栓插入深度时，要以毫米为单位进行调整，避免损伤血管；（8）注意术后保暖，每日注射庆大霉素针予以抗感染治疗，保障实验大鼠的存活率。3）入组标准及评分标准各组大鼠缺血再灌注 2h 手术清醒后，采用双盲法参照 Longa 6 级标准进行神经行为学评分：无神经功能缺损症状为 0 分；提尾时左前肢不能伸直为 1 分；向左侧转圈、追尾现象为 2 分；打滚、向左侧倾倒为 3 分；出现意识障碍或肢体偏瘫无法行走为 4 分；未苏醒或死亡为 5 分；评分值 1~3 分者入组，造模过程中大鼠出血过多、3h 未能苏醒、线栓插入过深导致蛛网膜下腔出血、Longa 评分 0 分、5 分等均剔除，如图 2。
图 3 对照组 SD 大鼠脑组织图例Fig. 3 examples of brain tissue of SD rats in control group因芯片筛选差异表达的 microRNAs microRNAs 测序等实验具体操作由上海生物工程有限公司协助完组织总RNA提取和质检机选取Sham组、I/R组及CIP组各8个样本组织标本（冰冻脑海马样本的总RNA我们采用Trizol法，并采用甲醛变性凝胶电泳（其完整性，其过程主要包括：组织匀浆（液氮中将海马组织研磨应用试剂为Trizol 试剂（Invitrogen公司）、RNA分离（主要应、氯仿，离心转速设定为12000 r/min，提取上清液）、RNA沉淀异丙醇液（北京博奥生物公司），离心转速设定为12000 r/min要应用试剂为预冷的75％乙醇，离心转速7500 r/min离心5 min，、RNA溶解（去除上清液，在55℃~60℃的温箱中孵育，提取总
【参考文献】：
期刊论文
[1]Neuroprotective effects of statins against amyloid β-induced neurotoxicity[J]. Hsin-Hua Li,Chih-Li Lin,Chien-Ning Huang. Neural Regeneration Research. 2018(02)
[2]促红细胞生成素在缺氧缺血性脑病大鼠模型中的神经保护作用[J]. 段淼,曹云涛,王旭芹. 中国比较医学杂志. 2018(01)
[3]葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤的影响及其机制[J]. 尹雪莉,桂丽,李珍. 安徽医科大学学报. 2015(06)
[4]阿托伐他汀预处理和缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 徐正虎,王君. 中华老年心脑血管病杂志. 2015(03)
[5]川芎嗪和缺血预适应对大鼠再灌注脑损伤的保护作用[J]. 李贵柱,陈前芬,马琳. 山西医科大学学报. 2010(02)
[6]川芎嗪对大鼠CIR顶叶皮质神经元超微结构及Caspase-9mRNA表达的影响[J]. 张辉,董建峰,呼东坡,王晓寅,牛书雷,薄爱华. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2009(04)
[7]川芎油对大鼠脑缺血再灌注后脑组织ICAM-1、血浆TNF-α及ET的影响[J]. 凌婧,邓文龙,张杰,李兴平,杨芳炬. 中药药理与临床. 2008(04)
[8]川芎嗪与葛根素合用对海马神经元损伤后的影响[J]. 王玉,万海同,严伟民,杨洁红,郭莹,潘远江,韩进,余勤. 中国中药杂志. 2008(04)
[9]缺氧预适应研究的进展与展望[J]. 吕国蔚. 生理科学进展. 2007(01)
[10]中国脑卒中的发病与趋势——三大城市的研究结果[J]. 乔曼丽,江滨,王文志,吴升平. 中国卒中杂志. 2006(08)
博士论文
[1]局灶性脑缺血预处理诱导的内源性神经保护作用及其炎性机制的实验研究[D]. 郝玉曼.四川大学 2004
本文编号：3112493
【文章来源】： 陈静君 华北理工大学
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠编码顺序及位置
利插入线栓；（4）注意尽量避免损伤在颈内颈外分叉下的交感神经节；（5）血管入颅骨时有一个狭窄或角度，插入线栓时要手法轻柔并且遇阻力即停止，忌用力过猛损伤血管，避免插入过深刺破大脑中动脉；（6）线栓勿在血管内反复进退，否则易造成蛛网膜下腔出血，导致造模成功的假象；（7）插入线栓速度尽量快，避免时间长了血管内血栓形成，调整尼龙线栓插入深度时，要以毫米为单位进行调整，避免损伤血管；（8）注意术后保暖，每日注射庆大霉素针予以抗感染治疗，保障实验大鼠的存活率。3）入组标准及评分标准各组大鼠缺血再灌注 2h 手术清醒后，采用双盲法参照 Longa 6 级标准进行神经行为学评分：无神经功能缺损症状为 0 分；提尾时左前肢不能伸直为 1 分；向左侧转圈、追尾现象为 2 分；打滚、向左侧倾倒为 3 分；出现意识障碍或肢体偏瘫无法行走为 4 分；未苏醒或死亡为 5 分；评分值 1~3 分者入组，造模过程中大鼠出血过多、3h 未能苏醒、线栓插入过深导致蛛网膜下腔出血、Longa 评分 0 分、5 分等均剔除，如图 2。
图 3 对照组 SD 大鼠脑组织图例Fig. 3 examples of brain tissue of SD rats in control group因芯片筛选差异表达的 microRNAs microRNAs 测序等实验具体操作由上海生物工程有限公司协助完组织总RNA提取和质检机选取Sham组、I/R组及CIP组各8个样本组织标本（冰冻脑海马样本的总RNA我们采用Trizol法，并采用甲醛变性凝胶电泳（其完整性，其过程主要包括：组织匀浆（液氮中将海马组织研磨应用试剂为Trizol 试剂（Invitrogen公司）、RNA分离（主要应、氯仿，离心转速设定为12000 r/min，提取上清液）、RNA沉淀异丙醇液（北京博奥生物公司），离心转速设定为12000 r/min要应用试剂为预冷的75％乙醇，离心转速7500 r/min离心5 min，、RNA溶解（去除上清液，在55℃~60℃的温箱中孵育，提取总
【参考文献】：
期刊论文
[1]Neuroprotective effects of statins against amyloid β-induced neurotoxicity[J]. Hsin-Hua Li,Chih-Li Lin,Chien-Ning Huang. Neural Regeneration Research. 2018(02)
[2]促红细胞生成素在缺氧缺血性脑病大鼠模型中的神经保护作用[J]. 段淼,曹云涛,王旭芹. 中国比较医学杂志. 2018(01)
[3]葛根素预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤的影响及其机制[J]. 尹雪莉,桂丽,李珍. 安徽医科大学学报. 2015(06)
[4]阿托伐他汀预处理和缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 徐正虎,王君. 中华老年心脑血管病杂志. 2015(03)
[5]川芎嗪和缺血预适应对大鼠再灌注脑损伤的保护作用[J]. 李贵柱,陈前芬,马琳. 山西医科大学学报. 2010(02)
[6]川芎嗪对大鼠CIR顶叶皮质神经元超微结构及Caspase-9mRNA表达的影响[J]. 张辉,董建峰,呼东坡,王晓寅,牛书雷,薄爱华. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2009(04)
[7]川芎油对大鼠脑缺血再灌注后脑组织ICAM-1、血浆TNF-α及ET的影响[J]. 凌婧,邓文龙,张杰,李兴平,杨芳炬. 中药药理与临床. 2008(04)
[8]川芎嗪与葛根素合用对海马神经元损伤后的影响[J]. 王玉,万海同,严伟民,杨洁红,郭莹,潘远江,韩进,余勤. 中国中药杂志. 2008(04)
[9]缺氧预适应研究的进展与展望[J]. 吕国蔚. 生理科学进展. 2007(01)
[10]中国脑卒中的发病与趋势——三大城市的研究结果[J]. 乔曼丽,江滨,王文志,吴升平. 中国卒中杂志. 2006(08)
博士论文
[1]局灶性脑缺血预处理诱导的内源性神经保护作用及其炎性机制的实验研究[D]. 郝玉曼.四川大学 2004
本文编号：3112493
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