Omi/HtrA2裂解线粒体融合蛋白OPA1诱导脑缺血再灌注细胞凋亡的机制

发布时间：2021-07-05 18:39

　　背景:脑缺血引起的脑神经细胞损伤机制依然是人们关注的重点。目前发现,某些蛋白在生理与病理过程中的作用不一致甚至截然相反。Omi/Htr A2是一种丝氨酸蛋白酶,在线粒体中发生剪切,使其具有酶活性,存于线粒体间隙,线粒体通过未折叠蛋白反应清除错误折叠蛋白,而线粒体应激主要表现在线粒体内未折叠蛋白的增加,Omi/Htr A2具有分子伴侣功能,参与了线粒体应激反应,此时具有一定的神经保护作用。当在某些应激条件下被释放到胞浆后与抑凋亡蛋白XIAP结合,并抑制XIAP与caspase9的结合,激活caspase9导致下游caspase3途径的活化,引起细胞凋亡。而线粒体融合蛋白OPA1定位于线粒体内膜,促进线粒体的网络融合,参与了线粒体嵴形态的维持,并在细胞凋亡中发挥了重要的作用。因此,明确具有双重作用的Omi/Htr A2在脑缺血再灌注细胞损伤中作用机制以及其与OPA1之间的关系可以为脑缺血再灌注损伤的临床诊断治疗提供新的思路和靶点。目的:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型与PC12氧化应激损伤模型,从体内外探讨Omi/Htr A2通过影响OPA1诱导神经元损伤的作用机制。方法:1.体内实验... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
主要英文缩略索引
第一章 绪论
    1.1 脑缺血再灌注损伤主要机制的概述
    1.2 氧化应激与缺血再灌注损伤
        1.2.1 ROS的产生
        1.2.2 氧化应激导致缺血再灌注损伤的机制
    1.3 Omi/HtrA2与脑缺血再灌注损伤
        1.3.1 线粒体丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的结构
        1.3.2 Omi/HtrA2诱导细胞凋亡
        1.3.3 Omi/HtrA2的神经保护作用
        1.3.4 Omi/HtrA2参与脑损伤
    1.4 线粒体应激与脑缺血再灌注损伤
    1.5 线粒体融合分裂与脑缺血再灌注损伤
        1.5.1 线粒体内膜融合相关蛋白OPA1
        1.5.2 线粒体网络动态平衡与脑损伤
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验细胞株
        2.1.3 主要仪器及来源
        2.1.4 主要药品及来源
        2.1.5 主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 tMCAO模型的制备
        2.2.2 TTC（红四氮唑）染色
        2.2.3 H＆E染色
        2.2.4 PC12细胞的培养
        2.2.5 MTT法测定细胞生存率
        2.2.6 总蛋白的提取
        2.2.7 蛋白浓度的测定
        2.2.8 Western Bloting
        2.2.9 JC-1 染色
        2.2.10 Mitotracker染色
        2.2.11 免疫共沉淀
    2.3 统计学处理
第三章 实验结果
    3.1 Omi/Htr A2在脑缺血再灌注损伤中的作用
        3.1.1 TTC 染色观察大鼠各组大脑梗死面积
        3.1.2 H＆E 染色观察大鼠脑皮质神经细胞损伤变化
        3.1.3 Western Blot 检测大鼠脑缺血侧皮质凋亡相关蛋白的表达
        3.1.4 Western Blot 检测大鼠脑缺血侧皮质 Omi/Htr A2 的表达
    3.2 Omi/Htr A2对氧化应激诱导凋亡的影响
        3.2.1 MTT检测不同浓度H2O2作用下PC12细胞存活率
        3.2.2 Western Blot检测不同浓度H2O2作用下PC12细胞凋亡蛋白的表达
        3.2.3 倒置显微镜下观察PC12细胞形态学变化
        3.2.4 台盼蓝染色测定PC12细胞存活率
        3.2.5 Western Blot检测细胞凋亡
        3.2.6 Western Blot检测PC12细胞Omi/HtrA2表达变化
    3.3 Omi/HtrA2 对 PC12 细胞线粒体形态及功能的影响
        3.3.1 Mitotracker染色观察Omi/HtrA2对PC12细胞线粒体形态变化的影响
        3.3.2 Western Blot检测PC12细胞线粒体应激反应相关蛋白的变化
        3.3.3 JC-1 染色检测PC12细胞线粒体膜电势变化
    3.4 Omi/HtrA2对PC12细胞OPA1表达变化的影响
        3.4.1 Western Blot检测PC12细胞OPA1变化
        3.4.2 免疫共沉淀检测Omi/Htr A2与OPA1的相互作用
第四章 讨论
结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响[J]. 官福新,周露露,张宸豪,李妍.  吉林医药学院学报. 2014(05)
[2]OPA1的研究进展[J]. 聂唯天,张歌,胡赢心,宫健,单春华.  现代生物医学进展. 2014(12)
[3]PC12细胞作为氧化应激细胞模型的研究进展[J]. 黎巍威,王学美.  中国中西医结合杂志. 2011(11)



本文编号：3266610