帕金森病患者血浆外泌体的分离鉴定及miRNA表达谱分析

发布时间：2017-05-01 20:02

  本文关键词：帕金森病患者血浆外泌体的分离鉴定及miRNA表达谱分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:microRNA(miRNA)是一种小的非编码RNA,通过促进靶mRNA降解或抑制其翻译起到转录后调节作用,近年来有研究报道miRNA参与帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发生发展,且某些差异表达的miRNA有助于PD的诊断。目的:对比分析PD患者与对照者血浆外泌体中的miRNA,并进行靶基因预测及KEGG通路分析,以寻找出有意义的miRNA。方法:1、分别收集13例散发性PD患者及与其年龄性别相匹配的健康对照者的血浆样本。2、用Invitrogen试剂盒从血浆中分离外泌体,通过q Nano测定浓度及大小分布,Western blot检测外泌体标记蛋白CD63、Alix的表达以对其进行鉴定。3、使用高通道测序检测两组血浆外泌体miRNA的表达差异。4、使用miRNA靶基因预测软件对mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195进行靶基因预测,并对预测的靶基因进行KEGG通路分析。结果:1、从血浆中分离出mode直径100nm、表达外泌体标记蛋白CD63和Alix的粒子,鉴定为外泌体。2、在表达明显差异(Ratio2.0,P0.05)的miRNA中,与对照组相比,PD组以上调为主(65.3%)。3、mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195预测的靶基因均参与神经营养因子信号通路。结论:1、本研究成功分离并鉴定了血浆外泌体。2、血浆外泌体mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195有望作为PD的生物标志物。
【关键词】：帕金森病 外泌体 血浆 微小RNA
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-23
• 2.1 实验材料12-14
• 2.1.1 主要试剂与材料12-13
• 2.1.2 主要仪器13-14
• 2.1.3 主要试剂的配制14
• 2.2 实验方法14-23
• 2.2.1 研究对象14-15
• 2.2.2 血浆样品收集15
• 2.2.3 血浆外泌体分离15-16
• 2.2.4 qNano分析血浆外泌体的浓度和大小分布16
• 2.2.5 Western blot鉴定血浆外泌体的标志蛋白16-18
• 2.2.6 血浆外泌体的RNA提取及浓度测定18-19
• 2.2.7 文库构建及测序19-22
• 2.2.8 统计学方法22-23
• 第3章 结果23-28
• 3.1 外泌体的鉴定23-24
• 3.2 外泌体RNA浓度测定24
• 3.3 外泌体miRNA测序结果分析24-28
• 3.3.1 样本测序结果的基本情况24
• 3.3.2 两组共表达及特异表达的外泌体miRNA24-25
• 3.3.3 两组外泌体miRNA的表达差异分析25-26
• 3.3.4 靶基因预测26
• 3.3.5 KEGG通路分析26-28
• 第4章 讨论28-30
• 第5章 结论与展望30-31
• 致谢31-32
• 参考文献32-35
• 攻读学位期间的研究成果35-36
• 综述36-42
• 参考文献40-42

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