载脂蛋白A-Ⅳ对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用的研究

发布时间：2021-10-07 07:32

　　目的:本研究旨在观察ApoA-Ⅳ对大鼠脑缺血再灌注后TNF-α,MMP-9和Lp-PLA2的影响,探讨其可能的脑保护作用及机制。方法:将180只成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术（MS）组,脑缺血再灌注（IR）组,ApoA-Ⅳ小剂量（LD,50μg/kg体重）组和ApoA-Ⅳ大剂量（HD,75μg/kg体重）组,每组45只,每组按缺血2h再灌注后12h,24h,48h分为3个时间点,每个时间点各15只。在IR组,LD组和HD组,采用改良Longa缝合法制备右侧大脑中动脉闭塞和再灌注动物模型。MS组仅切开皮肤并分离动脉。LD组及HD组在缺血2h后再灌注时阴茎背静脉注射相应剂量ApoA-Ⅳ一次。在大鼠缺血再灌注后的相应时间点,用Longa评分标准评估神经功能,并通过氯化三苯基四氮唑（TCC）染色检测脑梗死的体积。用ELISA法检测血清Lp-PLA2、MMP-9和TNF-α的含量,用免疫组织化学染色（DAB法）检测脑组中TNF-α、Lp-PLA2和MMP-9蛋白的表达。用qPCR检查脑组织中TNF-α、Lp-PLA2和MMP-9的mRNA水平的表达。结果:1.各组大鼠神经功能评分的比较:I... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

阴茎背静脉注射药物

(1)小剂量 ApoA-Ⅳ的配制：用生理盐水配成含 ApoA-Ⅳ10μg/ml(2)大剂量 ApoA-Ⅳ的配制：用生理盐水配成含 ApoA-Ⅳ20μg/ml(3)PBS 缓冲液的配制：称取 8gNaCl，0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和 0.24KH2PO4 800ml 双蒸水中，用 NaCl 将溶液的 pH 调节至 7.4，最后用蒸馏水定容至 1L，保存备用。用于免疫组化者，在配置的时候分别加入 100u/ml 青霉素和链霉素之调 pH、定容。(4)2%TTC 溶液配制：称取 TTC(红四氮唑粉末)6g，溶于 300mlPBS 溶液中，4光保存。(5)25%乌拉坦配制：1g 乌拉坦加 4ml 生理盐水。.2.3 实验动物给药ApoA-Ⅳ小剂量组按 50μg/kg 体重，大剂量组按 75μg/kg 体重，于缺血 2h 后再时用 5.5 号头皮针阴茎背静脉注射给药，给药物后用约 1ml 生理盐水冲管保证药全输入静脉内（如图 2）

1.2.5 实验动物模型制作采用 Longa[27]线栓法制备右侧大脑中动脉(Middle cerebral artery,MCA)阻注大鼠模动物模型。(1)大鼠称重并记录体重后，用10%葡萄糖、0.9%盐水和牛奶(三者的比例为按 10ml/kg 体重灌胃，目的是防止术中出血较多血容量不足及术后增加营养，型后存活率(2) 灌胃后 30 分钟，按 0.3ml/100g 体重给 25%乌拉坦，通过腹腔注射麻醉麻醉后将四肢固定于大鼠操作板上。(3) 用电动剃刀清洁手术视野的鼠毛，碘伏消毒手术区域皮肤，取颈部正右侧约 5mm 纵行切开皮肤大约 3-5cm，逐层钝性分离皮下组织及肌肉，充分侧颈总动脉(Common carotid artery,CCA)，延解剖结构找到右侧颈内动脉(carotid artery,ICA)及右侧颈外动脉(External carotid artery,ECA)，分离迷走神经nerve)（图 4），勿钳夹迷走神经。


本文编号：3421619