ATP-P2X4信号轴对帕金森病动物模型脑白介素1及BDNF表达的影响
发布时间：2021-10-08 09:30
目的本课题通过探讨使用慢病毒过表达P2X4基因（LV-P2rx4）对6-羟基多巴（6-OHDA）诱导的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型大鼠脑黑质中多巴胺能神经元数量以及白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表达水平的影响,来研究ATP-P2X4信号轴与炎性因子IL-1β和神经保护因子BDNF在PD发病过程中的作用。方法采用体质量200～250 g的健康Wistar雄性大鼠,随机分为6组,每组20只。经立体定向定位左侧黑质,A.对照（Control）组:注入含0.02%抗坏血酸的生理盐水,B.PD模型（6-OHDA）组:注入6-羟基多巴（6-OHDA）,C.目的基因阴性对照（RNA-P2X4）组:注入携带过表达P2X4基因的慢病毒,D.空载病毒阴性对照组（P2X4-NC）组:注入空载阴性病毒;E.目的基因阴性对照+PD模型（RNA-P2X4+6-OHDA）组:先注入携带过表达P2X4基因的慢病毒1周后再注射6-OHDA;F.空载病毒阴性对照...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒在黑质TH阳性多巴胺
实验结果11实验结果1.免疫荧光染色检测结果1.1免疫荧光染色检测慢病毒表达免疫荧光染色结果显示携带过表达P2X4基因的慢病毒在大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元中表达稳定（图1），可进行后续实验。图1慢病毒在黑质TH阳性多巴胺能神经元中的表达情况（×400）注：1.酪氨酸羟化酶(TH)在大鼠黑质多巴胺能神经元中的表达；2.携带过表达P2X4基因的慢病毒在大鼠黑质多巴胺能神经元中的表达；3.携带过表达P2X4基因的慢病毒在TH阳性多巴胺能神经元中的表达。Notes:1.ExpressionofTHindopaminergicneuronsinsubstantianigaofrats.2.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinratsubstantianigadopaminergicneurons.3.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinTHpsitivedopaminergicneuronsofratsubstantianiga.1.2免疫荧光染色检测TH阳性多巴胺能神经元计数本实验结果显示（表2，图2、3）：①与对照组相比，6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量有所减少，差异具有统计学意义(P<0.05,F=3.79)。②与6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组相比，RNA-P2X4+6-OHDA组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量减少显著，差异具有统计学意义(P<0.001,F=8.96)。③与对照组相比，RNA-P2X4组和P2X4-NC组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量变化不明显，差异不具有统计学意义（P>0.05）。
青岛大学硕士学位论文12图2各组大鼠脑内黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量（×100）Fig2ThenumberofTHpositivedopaminergicneuronsindifferentgroups（×100）注：A=对照组；B=PD模型组；C=目的基因阴性对照组；D=空载病毒阴性对照组；E=目的基因阴性对照+PD模型组；F=空载病毒阴性对照+PD模型组。Notes:A=Controlgroup;B=6-OHDAgroup;C=RNA-P2X4group;D=P2X4-NCgroup;E=RNA-P2X4+6-OHDAgroup;F=P2X4-NC+6-OHDAgroup.Comparedtothecontrolgroup.
【参考文献】：
期刊论文
[1]帕金森病患者认知功能障碍与血清BDNF及TrkB水平的关系研究[J]. 张立群,刘崴,王钰. 中国实用神经疾病杂志. 2019(21)
[2]帕金森病患者血尿酸水平与认知功能、炎性因子及神经细胞因子的相关性[J]. 彭雪梅,邓婧,李琴,蔡敏. 疑难病杂志. 2019(02)
[3]沉默P2X4R基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子α表达的影响[J]. 许文帅,薛莉,蔡敏,谢安木. 中国临床神经科学. 2019(01)
[4]白介素-1β的分泌及其影响因素[J]. 袁维卓,刘丽兰,张睿迪,王健宇,孙雪纯,李媛媛,刘良晨,关宝生. 牡丹江医学院学报. 2018(06)
[5]脑源性神经营养因子对左旋多巴诱发的帕金森病异动症大鼠行为的影响及其作用机制[J]. 甄体丽,赵君焱,舒海洋,黄译腺,包仕尧,刘春风,罗蔚锋. 临床神经病学杂志. 2017(01)
[6]嘌呤P2受体的免疫调节功能[J]. 周金凤,覃朝燕,赖炜明,杜昌升. 中国细胞生物学学报. 2015(08)
[7]Functional interactions between steroid hormones and neurotrophin BDNF[J]. Tadahiro Numakawa,Daisaku Yokomaku,Misty Richards,Hiroaki Hori,Naoki Adachi,Hiroshi Kunugi. World Journal of Biological Chemistry. 2010(05)
本文编号：3423892
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒在黑质TH阳性多巴胺
实验结果11实验结果1.免疫荧光染色检测结果1.1免疫荧光染色检测慢病毒表达免疫荧光染色结果显示携带过表达P2X4基因的慢病毒在大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元中表达稳定（图1），可进行后续实验。图1慢病毒在黑质TH阳性多巴胺能神经元中的表达情况（×400）注：1.酪氨酸羟化酶(TH)在大鼠黑质多巴胺能神经元中的表达；2.携带过表达P2X4基因的慢病毒在大鼠黑质多巴胺能神经元中的表达；3.携带过表达P2X4基因的慢病毒在TH阳性多巴胺能神经元中的表达。Notes:1.ExpressionofTHindopaminergicneuronsinsubstantianigaofrats.2.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinratsubstantianigadopaminergicneurons.3.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinTHpsitivedopaminergicneuronsofratsubstantianiga.1.2免疫荧光染色检测TH阳性多巴胺能神经元计数本实验结果显示（表2，图2、3）：①与对照组相比，6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量有所减少，差异具有统计学意义(P<0.05,F=3.79)。②与6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组相比，RNA-P2X4+6-OHDA组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量减少显著，差异具有统计学意义(P<0.001,F=8.96)。③与对照组相比，RNA-P2X4组和P2X4-NC组大鼠脑黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量变化不明显，差异不具有统计学意义（P>0.05）。
青岛大学硕士学位论文12图2各组大鼠脑内黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量（×100）Fig2ThenumberofTHpositivedopaminergicneuronsindifferentgroups（×100）注：A=对照组；B=PD模型组；C=目的基因阴性对照组；D=空载病毒阴性对照组；E=目的基因阴性对照+PD模型组；F=空载病毒阴性对照+PD模型组。Notes:A=Controlgroup;B=6-OHDAgroup;C=RNA-P2X4group;D=P2X4-NCgroup;E=RNA-P2X4+6-OHDAgroup;F=P2X4-NC+6-OHDAgroup.Comparedtothecontrolgroup.
【参考文献】：
期刊论文
[1]帕金森病患者认知功能障碍与血清BDNF及TrkB水平的关系研究[J]. 张立群,刘崴,王钰. 中国实用神经疾病杂志. 2019(21)
[2]帕金森病患者血尿酸水平与认知功能、炎性因子及神经细胞因子的相关性[J]. 彭雪梅,邓婧,李琴,蔡敏. 疑难病杂志. 2019(02)
[3]沉默P2X4R基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子α表达的影响[J]. 许文帅,薛莉,蔡敏,谢安木. 中国临床神经科学. 2019(01)
[4]白介素-1β的分泌及其影响因素[J]. 袁维卓,刘丽兰,张睿迪,王健宇,孙雪纯,李媛媛,刘良晨,关宝生. 牡丹江医学院学报. 2018(06)
[5]脑源性神经营养因子对左旋多巴诱发的帕金森病异动症大鼠行为的影响及其作用机制[J]. 甄体丽,赵君焱,舒海洋,黄译腺,包仕尧,刘春风,罗蔚锋. 临床神经病学杂志. 2017(01)
[6]嘌呤P2受体的免疫调节功能[J]. 周金凤,覃朝燕,赖炜明,杜昌升. 中国细胞生物学学报. 2015(08)
[7]Functional interactions between steroid hormones and neurotrophin BDNF[J]. Tadahiro Numakawa,Daisaku Yokomaku,Misty Richards,Hiroaki Hori,Naoki Adachi,Hiroshi Kunugi. World Journal of Biological Chemistry. 2010(05)
本文编号：3423892
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