环孢菌素A通过结合CypD抑制mPTP开放对大鼠实验性脑出血的作用及其机制研究

发布时间：2017-05-07 06:13

  本文关键词：环孢菌素A通过结合CypD抑制mPTP开放对大鼠实验性脑出血的作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：环孢菌素A(CsA)通过结合亲环蛋白D(CYPD)抑制线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放,维持线粒体内稳态和阻止凋亡诱导因子释放,从而抑制细胞的坏死和凋亡,改善神经功能评分。本研究旨在探讨环孢菌素A对大鼠实验性脑出血的凋亡和坏死信号通路的影响。方法：1.实验分组：240只雄性SD大鼠(280g-330g)随机分为Sham组(n=48)、ICH组(n=48)、ICH+Vehicle(n=48)、ICH+CsA5mg组(n=48)、 ICH+ CsAlOmg组(n=48)五个组。2.模型制作及药物处理：大鼠脑出血模型是右侧基底节区注射O.1ml自体全血(坐标：囟门前0.2毫米,旁3.5毫米和腹侧深5.5毫米)。药物处理组是术后15min经尾静脉注射给药,后每天一次。3.神经功能评分：采用华娅教授评分法进行评分,分值越高代表神经功能损害越轻,反之,损伤越重。4.脑水含量检测及脑水肿观察：脑出血后24h用干湿重法检测脑水含量。脑出血后24h用MRI检测脑水肿情况。5.血脑屏障检测：脑出血后24h用伊文思蓝法检测血脑屏障通透性。6.细胞凋亡检测：脑出血后72h用TUNEL法检测细胞凋亡。7.细胞坏死检测：脑出血后72h用PI法检测细胞坏死。8.免疫荧光检测：脑出血后72h用免疫荧光检测CypD、AIF及核AIF蛋白变化情况。9.免疫印记检测：脑出血后24h用免疫印记法检测CypD、AIF及核AIF蛋白表达。10.线粒体观察：脑出血后72h电镜观察线粒体形态变化。11.细胞形态观察：脑出血后7d用MISSL染色和HE染色检测细胞形态结构。12.统计分析：采用SSPS17.0软件,结果均以x±s表示,采用单因素方差分析,组间比较用Student's检验分析的方法,P0.05为显著性标准。结果：1.脑出血后72h神经功能评分显著较Sham组差(p0.01), CsA治疗组较ICH组(p0.01)、ICH+Vehicle组(p0.01)显著改善。2.脑出血后24h脑水含量显著较Sham组增加(p0.01), ICH+CsA5mg组、ICH+ CsA10mg组较ICH组(p0.01)、ICH+Vehicle组(p0.01)显著降低。脑出血后24h行MRI扫描示脑水肿显著增强,治疗组显著减轻。3.脑出血后24h血脑屏障通透性较Sham组显著破坏(p0.01),ICH+CsAlOmg组较ICH组、ICH+CsA5mg组显著改善(p0.01)。4.脑出血后72h凋亡细胞数较Sham组显著增加(p0.01), ICH+ CsA10mg组较ICH组、ICH+CsA5mg组凋亡细胞数显著减少(p0.01), ICH+CsA5mg组较ICH+ CsAlOmg组凋亡细胞数显著增多(p0.01)。5.脑出血后72h坏死细胞数显著较Sham组多(p0.01),ICH+ CsAlOmg组较ICH组(p0.01)、ICH+CsA5mg组(p0.01)坏死细胞数显著减少,ICH+CsA5mg组较ICH+ CsAlOmg组坏死细胞数显著增多(p0.01)。6.脑出血后24h用免疫印记法检测CypD、AIF及核AIF蛋白表达较Sham组显著增加(p0.01), ICH+ CsAlOmg组较ICH组(p0.01)、ICH+CsA5mg组(p0.01)显著降低。7.脑出血后72h线粒体水肿明显,ICH+CsA5mg组、ICH+CsAlOmg组线粒体水肿好转。8.脑出血后7d细胞衰减明显,ICH+CsA5mg组、ICH+ CsA10mg组细胞形态发生改变且细胞数目未见显著衰减。结论：在ICH模型中,CsA能够降低脑水含量和减轻早期脑水肿,改善早期血脑屏障通透性。CsA能够结合CypD,抑制AIF释放和核转位,阻止mPTP开放,保护线粒体内稳态,抑制细胞凋亡和坏死,改善EBI,提高神经功能评分。
【关键词】：环孢菌素A 脑出血 线粒体膜通透性 凋亡 坏死
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.34

  本文关键词：环孢菌素A通过结合CypD抑制mPTP开放对大鼠实验性脑出血的作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：349329