TERT基因甲基化、突变及表达在脑胶质瘤患者中的研究

发布时间：2017-05-08 19:18

  本文关键词：TERT基因甲基化、突变及表达在脑胶质瘤患者中的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：端粒酶逆转录酶基因(Telomerase reverse transcriptase, TERT)编码的端粒酶逆转录酶是组成端粒酶的关键部分,并在维持端粒稳定与控制细胞无限增殖中起着重要的作用。在多种人类肿瘤中TERT基因的激活受到严格控制。然而,在脑胶质瘤中TERT基因的活化调控机制仍不完全清楚。有研究表明TERT基因启动子区C228T、C250T两个位点突变和启动子区的甲基化都会影响脑胶质瘤患者中TERT基因的表达。本研究共收集77例脑胶质瘤样本,通过Sanger直接测序确定样本TERT基因C228T、C250T突变情况；通过焦磷酸测序确定TERT基因启动子区甲基化程度与脑胶质瘤中重要分子标志物IDH1基因突变情况；通过实时定量PCR检测TERT基因mRNA的表达水平。通过数据分析发现TERT基因mRNA的表达水平在存在TERT基因启动子突变的患者中显著升高(P=0.005)。TERT基因启动子区甲基化程度在不同级别脑胶质瘤患者中存在显著差异,高级别样本中甲基化程度更高。虽然大部分TERT基因启动子区甲基化程度高的样本有较高的mRNA表达水平,但两者之间的相关关系不显著。然而,存在IDHl基因突变的患者中TERT基因启动子区甲基化程度与mRNA的表达水平呈负相关。并且TERT基因启动子区甲基化程度在IDH1基因突变的患者中显著升高(P=0.023); TERT基因突变也被发现在恶性程度最高的Ⅳ级胶质瘤最为常见(9/21,42.9%)。本研究表明在中国成人脑胶质瘤患者中,TERT基因启动子区突变及甲基化与IDHl基因突变共同调节TERT基因mRNA的表达水平。并且TERT可做为脑胶质瘤潜在的分子标志物。
【关键词】：脑胶质瘤 TERT基因 突变 甲基化 mRNA表达
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 前言8-10
• 第一章 绪论10-19
• 1.1 脑胶质瘤的简介10
• 1.2 脑胶质瘤重要分子标志物10-11
• 1.2.1 IDH1基因突变10-11
• 1.2.2 MGMT启动子甲基化11
• 1.2.3 染色体lp/19q缺失11
• 1.3 端粒酶逆转录酶基因简介11-12
• 1.4 肿瘤中TERT基因的突变12-15
• 1.4.1 TERT基因突变12-14
• 1.4.2 TERT基因突的临床意义14-15
• 1.5 肿瘤中TERT基因启动子区甲基化15-17
• 1.5.1 DNA甲基化修饰及其研究意义15-16
• 1.5.2 TERT基因的甲基化16-17
• 1.6 论文研究内容与意义17-19
• 第二章 脑胶质瘤样本处理19-23
• 2.1 脑胶质瘤样本收集19
• 2.2 肿瘤样本基因组DNA提取19-20
• 2.2.1 实验材料、试剂与仪器19
• 2.2.2 实验步骤19-20
• 2.3 肿瘤样本总RNA提取20-21
• 2.3.1 实验材料、试剂与仪器20-21
• 2.3.2 实验步骤21
• 2.4 实验结果21-22
• 2.5 本章小结22-23
• 第三章 脑胶质瘤样本TERT基因启动子区甲基化程度检测23-33
• 3.1 焦磷酸测序技术定量检测TERT基因甲基化的实验原理23-24
• 3.1.1 常用的甲基化检测方法23-24
• 3.1.2 焦磷酸测序实验原理24
• 3.2 焦磷酸测序技术定量检测TERT基因启动子区域甲基化的实验流程24-28
• 3.2.1 实验材料、试剂与仪器24-25
• 3.2.2 实验步骤25-28
• 3.3 实验结果与数据分析28-32
• 3.3.1 焦磷酸测序结果28-31
• 3.3.2 实验数据分析31-32
• 3.4 本章小结32-33
• 第四章 脑胶质瘤样本TERT基因mRNA表达水平检测33-42
• 4.1 qRT-PCR的原理33-34
• 4.2 qRT-PCR技术检测脑胶质瘤样本TERT基因mRNA表达34-37
• 4.2.1 实验材料、试剂与仪器34
• 4.2.2 实验步骤34-37
• 4.3 实验结果和分析37-40
• 4.3.1 脑胶质瘤样本mRNA表达水平检测结果37-38
• 4.3.2 实验数据分析38-40
• 4.4 本章小结40-42
• 第五章 脑胶质瘤样本TERT基因与IDH1基因突变检测42-50
• 5.1 Sanger法检测TERT基因C228T,C250T突变42-44
• 5.1.1 实验材料、试剂和仪器42
• 5.1.2 实验步骤42-43
• 5.1.3 实验结果及数据分析43-44
• 5.2 焦磷酸测序检测脑胶质瘤样本IDH1基因R132H突变44-46
• 5.2.1 实验材料、试剂和仪器44-45
• 5.2.2 实验步骤45
• 5.2.3 实验结果与数据分析45-46
• 5.3 TERT基因甲基化、mRNA表达与突变的关系46-48
• 5.3.1 IDH1基因突变与TERT基因甲基化程度、mRNA表达水平关系46-48
• 5.3.2 TERT基因突变与其UTSS区甲基化程度、mRNA表达水平关系48
• 5.4 本章小结48-50
• 全文小结50-52
• 参考文献52-60
• 攻读硕士学位期间参加的主要科研项目60-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陈旭;齐凤坤;康立功;李景富;;实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J];东北农业大学学报;2010年08期

2 屈振亮;端粒酶逆转录酶基因的结构特点及转录调控[J];国外医学(分子生物学分册);2002年05期

3 张海燕;赵洪斌;田亚平;马庆伟;;DNA甲基化检测技术与应用前景[J];标记免疫分析与临床;2013年05期

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本文编号：351737