骨髓间充质干细胞内源性IL-6调节OGD损伤星形胶质细胞的机制研究

发布时间：2017-05-19 08:22

  本文关键词：骨髓间充质干细胞内源性IL-6调节OGD损伤星形胶质细胞的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分骨髓间充质干细胞分离共培养对OGD损伤星形胶质细胞的影响目的利用氧糖剥夺(OGD)损伤的星形胶质细胞与MSCs分离共培养模型,探讨MSCs对OGD损伤星形胶质细胞的影响。方法原代大鼠培养星形胶质细胞,利用星形胶质细胞标志蛋白GFAP对其进行鉴定。建立星形胶质细胞OGD损伤模型,并与MSCs分离共培养,同时以未损伤星形胶质细胞(control组)和单独OGD损伤组(OGD组)为对照。ELISA检测共培养上清中IL-6分泌情况,Real-time PCR和western blot分别检测IL-6信号通路相关因子及Bcl-2. Bax凋亡相关因子的mRNA及蛋白表达变化。钙影像系统检测ATP刺激后不同处理组星形胶质细胞胞中Ca2+浓度,CCK-8试剂盒检测星形胶质细胞的增殖状况。结果(1)经GFAP免疫荧光方法鉴定,原代培养的星形胶质细胞纯度超过95%。(2)ELISA检测显示MSCs分离共培养后的损伤星形胶质细胞共培养液中IL-6的分泌水平明显高于OGD组(P0.05)。(3)与MSCs分离共培养后,OGD损伤的星形胶质细胞中凋亡因子Bcl-2表达水平显著升高(P0.01), Bax表达水平略有降低,但Bcl-2/Bax的表达水平比值却明显高于其他两组(P0.05)。(4) MSCs共培养诱导损伤星形胶质细胞中IL-6信号通路相关分子IL-6R和STAT3在mRNA和蛋白表达水平均呈现显著上调。(5)与control组相比,ATP刺激可诱导OGD损伤的星形胶质细胞胞内Ca2+水平瞬间升高(P0.001),而MSCs分离共培养可显著降低OGD损伤细胞内Ca2+水平(P0.05)。(6)OGD损伤后星形胶质细胞增殖加速,而MSCs分离共培养可抑制损伤的星形胶质细胞增殖能力。结论OGD损伤导致星形胶质细胞Bcl-2/Bax表达水平比值下降,胞内Ca2+浓度增加,细胞增殖能力上调；而MSCs分离共培养上调共培养上清中IL-6分泌水平,激活OGD损伤星形胶质细胞中IL-6R/STAT3信号通路,提高Bcl-2/Bax的比值,降低损伤细胞胞内Ca2+释放,抑制损伤星形胶质细胞增殖。第二部分骨髓间充质干细胞内源性IL-6对星形胶质细胞损伤修复的调节目的利用siIL-6 MSCs稳定细胞株,与OGD损伤星形胶质细胞分离共培养,阐明MSCs内源性IL-6对损伤星形胶质细胞的作用。方法将siIL-6 MSCs细胞与OGD损伤星形胶质细胞分离共培养,并以GFP MSCs为对照,ELISA测定共培养上清中IL-6分泌水平,Real-time PCR和western blotting分别检测IL-6信号通路关键分子IL-6R、STAT3及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的mRNA及蛋白表达水平,钙影像系统测定分离共培养后损伤星形胶质细胞胞内Ca2+浓度变化情况,CCK-8试剂盒检测损伤星形胶质细胞的增殖情况。结果(1)siIL-6 MSCs分离共培养可明显下调培养上清IL-6的分泌水平(P0.01)。(2)siIL-6 MSCs分离共培养后,OGD损伤星形胶质细胞中IL-6信号通路关键分子IL-6R与p-STAT3表达水平均显著下降(P0.01,P0.01)。(3) OGD损伤星形胶质细胞与siIL-6 MSCs分离共培养后,其凋亡因子Bcl-2的表达水平明显低于GFP MSCs组(P 0.01), Bax表达水平略有增高,但Bcl-2/Bax的表达水平比值显著减小,与GFP MSCs组比较具有统计学差异(P0.01)。(4) ATP可诱导与siIL-6 MSCs分离共培养后的损伤星形胶质细胞内Ca2+释放明显增加(P0.05)。(5)siIL-6 MSCs分离共培养促进损伤星形胶质细胞增殖能力增强。结论当MSCs中IL-6分泌水平下降时,与其共培养的OGD损伤星形胶质细胞IL-6R/STAT3信号通路活性减弱,Bcl-2/Bax表达水平比值下降,胞内Ca2+释放增加,细胞增殖能力增强。第三部分外源性细胞因子IL-6对OGD损伤星形胶质细胞的影响目的应用外源性细胞因子IL-6干预OGD损伤的星形胶质细胞,比较重组细胞因子IL-6与MSCs内源性分泌IL-6对损伤星形胶质细胞的作用。方法将重组细胞因子IL-6处理OGD损伤星形胶质细胞48h,并以IL-6未处理的OGD损伤星形胶质细胞为对照,ELISA测定培养上清中IL-6的浓度,western blotting检测两组损伤星形胶质细胞中IL-6信号通路关键分子IL-6R、STAT3及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的蛋白表达水平变化。钙影像系统测定损伤星形胶质细胞中Ca2+浓度,CCK-8试剂盒检测损伤星形胶质细胞的增殖情况。结果(1)IL-6干预后,细胞培养上清中IL-6的浓度尽管较单独OGD损伤组有所增高,但经统计学分析无显著差异(P0.05)。(2)外源性IL-6可显著上调IL-6R及磷酸化STAT3的表达水平。(3)IL-6干预组细胞凋亡因子Bcl-2的蛋白表达水平明显升高,Bax的表达水平显著降低,Bcl-2/Bax表达水平比值显著增加,与OGD损伤组比较具有统计学差异(P0.01)。(4)ATP刺激可明显诱导IL-6干预组中OGD损伤星形胶质细胞胞内Ca2+浓度的升高,但其升高幅度与单独OGD损伤组比较无统计学差异(P0.05)。(5)损伤星形胶质细胞的增殖能力在两组间无明显差异。结论外源性IL-6可诱导IL-6R/STAT3信号通路激活,增加Bcl-2/Bax表达水平比值,从而增强OGD损伤星形胶质细胞的抗凋亡能力。但重组细胞因子IL-6并不影响损伤星形胶质细胞胞质中Ca2+的水平,以及活性星形胶质细胞增殖能力。
【关键词】：OGD损伤 骨髓间充质干细胞 星形胶质细胞 白细胞介素-6信号通路 凋亡因子 siIL-6 MSCs 分离共培养 白细胞介素-6 凋亡 钙影像 Ca~(2+) 增殖 重组细胞因子IL-6 OGD损伤 IL-6信号通路 抗凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-22
• 参考文献19-22
• 第一部分 骨髓间充质干细胞分离共培养对OGD损伤星形胶质细胞的影响22-46
• 1 材料与方法22-34
• 2 结果34-40
• 3 讨论40-42
• 4 小结42-43
• 参考文献43-46
• 第二部分 骨髓间充质干细胞内源性IL-6对星形胶质细胞损伤修复的调节46-59
• 1 材料与方法46-47
• 2 结果47-52
• 3 讨论52-54
• 4 小结54-55
• 参考文献55-59
• 第三部分 外源性细胞因子IL-6对OGD损伤星形胶质细胞的影响59-68
• 1 材料与方法59-60
• 2 结果60-64
• 3 讨论64-65
• 4 小结65-66
• 参考文献66-68
• 全文总结68-69
• 文献综述69-85
• 参考文献76-85
• 致谢85-86
• 硕士期间发表的学术论文目录86

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本文编号：378195