骨髓间充质干细胞对防治失神经肌肉萎缩的实验研究

发布时间：2017-05-21 20:29

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对防治失神经肌肉萎缩的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本实验将成年大鼠的骨髓细胞采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)进行培养、传代,并选取BMSCsCD44及CD45抗原表型来鉴定获得干细胞,然后注入大鼠失神经肌肉模型的神经断端,观察骨髓间充质干细胞对失神经支配骨骼肌萎缩的防治作用,并为临床治疗提供新的理论依据。方法：1取SD大鼠1只,无菌条件下取股骨和胫骨的骨髓细胞,将骨髓细胞用percoll分离液(比重1.077)分离骨髓间充质干细胞的单个核细胞,然后将单细胞悬液接种于含15%小牛血清DMEM培养基进行培养、纯化和扩增。描画出MSCs生长曲线,通过免疫组化法检测干细胞CD44、CD45表面标志物。2选取健康SD大鼠36只,切断左侧后肢坐骨神经制备神经缺损模型,随机分为观察组和对照组,观察组肌肉注射1.5×105个/ml的骨髓间充质干细胞悬液0.2 ml,对照组注入同等剂量低糖DMEM培养液,分别于2、4、6周后对2组大鼠进行大体观察、检测肌湿重、肌纤维横截面积、坐骨神经指数(SFI),免疫组织化学法检测肌肉组织Bcl-2、Bax的表达变化。结果：利用密度梯度离心结合贴壁筛选法能有效分离纯化BMSCs,培养出的细胞均具有典型的干细胞形态特征,传代后细胞增殖速度较快。BMSCs标志物CD44呈阳性表达,造血干细胞标志物CD45阴性表达。造模后2、4、6周,观察组大鼠腓肠肌湿重、腓肠肌纤维横截面积均显著高于对照组,SFI则显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。术后2、4、6周,观察组肌肉组织中Bcl-2阳性细胞表达强度均高于对照组,Bax阳性细胞表达强度均低于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论：1.用密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离出纯度较高的BMSCs,并具有良好的增殖速度,体外培养的后的BMSCs可进行体内移植,并在局部损伤微环境中发挥作用。2. BMSCs可提高失神经后骨骼肌湿重和肌纤维横截面积,并上调Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,从而减少肌细胞凋亡,延缓失神经支配骨骼肌萎缩,对失神经骨骼肌具有保护作用。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 失神经 肌肉萎缩
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R746.4
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 1 材料与方法10-18
• 2 结果18-20
• 3 讨论20-25
• 4 结论25-26
• 附图26-32
• 参考文献32-36
• 综述：组织工程的失神经肌萎缩的研究进展36-53
• 参考文献47-53
• 中英文缩略词表53-54
• 攻读学位期间发表文章情况54-55
• 致谢55-56
• 个人简历56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 何涛;黄红军;张金明;;肌源性干细胞的研究进展[J];中华实验外科杂志;2006年03期

2 刘黎军,朱家恺,肖建德;雪旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致运动神经元死亡的保护作用[J];中华实验外科杂志;1999年04期

3 党跃修;王栓科;孙正义;汪玉良;夏亚一;冯万文;;腹腔注射ATP对大鼠坐骨神经再生影响的实验研究[J];中华显微外科杂志;2006年02期

4 田涛,吴朝晖,金惠铭,顾玉东;大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞凋亡的研究[J];中华医学杂志;2000年07期

5 王光林,杨志明,解慧琪,王翠莹,李胜富;周围神经组织工程材料的预构[J];中国修复重建外科杂志;2000年02期

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对防治失神经肌肉萎缩的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：384780