心肌营养素1促进人脐血间充质干细胞神经分化及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的交互作用

发布时间：2023-11-07 20:31

　　目的:探讨心肌营养素1(cardiotrophin 1,CT1)对人脐血间充质干细胞(humanumbilical cord blood-derived MSCs,h UCB-MSCs)诱导神经分化的促进作用及MAPK/ERK和PI3K/Ak信号通路在此过程中是否存在交互作用。方法:(1)h UCB-MSCs分离、培养及鉴定:采集人脐血标本,采用改良密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养及纯化h UCB-MSCs,采用流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标记;(2)腺病毒转染:用Adv-CT1及Adv-EGFP以感染复数(MOI)=100PFU/cell分别转染h UCB-MSCs;(3)神经诱导分化:采用神经诱导剂(全反式维甲酸、谷氨酰胺及无血清高糖培养基)诱导h UCB-MSCs向神经方向分化,于诱导后6h及4d观察各组形态学变化,共聚焦显微镜观察神经元特异性核蛋白(Neu N)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况;(4)选用不同si RNA浓度(25n M、50n M、100n M)摸索最佳转染效率;(5)用si RNA-ERK及si RNA-Akt以最佳转染效率的si RNA浓度转染神...

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