胶质瘤干细胞的3D培养及其核酸适体筛选的探索

发布时间：2017-06-23 17:02

  本文关键词：胶质瘤干细胞的3D培养及其核酸适体筛选的探索，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1、拟采用3D培养技术模拟体内环境研究胶质瘤干细胞增殖的异质性及一些生物特性。2、在体外进行人工合成核酸适体文库合成,使用Cell-SELEX技术进行筛选,以期得到可以特异性识别胶质瘤干细胞的核酸适体。方法:1、利用微孔阵列芯片技术制作出高通量微胶原蛋白阵列,然后使用固定力的按压方式,使细胞均匀分布于阵列中,形成三维培养模型。三维长期培养条件下,进行高通量胶质瘤干细胞单细胞异质性分析。2、使用化学方法人工合成的随机寡核苷酸库,以体外培养的的人胶质母细胞瘤细胞系U251细胞诱导出的胶质瘤干细胞为靶细胞,以人胶质母细胞瘤细胞系U251细胞为反筛细胞,利用Cell-SELEX技术,进行核酸适体筛选。结果:1、胶质瘤细胞可以高通量微胶原蛋白阵列中长期存活,并且增殖,细胞活性没有影响。2、经过7天、30天培养,观察、鉴定,3D培养条件下可以观察到胶质瘤干细胞与胶质瘤细胞之间的增殖能力差异及各自细胞传代过程中异质性。3、经过15轮循环的筛选得到了可以结合胶质瘤干细胞的核酸适体文库4、这个核酸适体库可以很好地与人脑胶质瘤干细胞结合,而不与人脑胶质瘤细胞系U251相结合。结论:1、建立了一种高通量单细胞三维培养平台,用于胶质瘤干细胞细胞异质性的分析。胶质瘤子细胞传代具有局限性,而胶质瘤干细胞几乎可以无限增殖。2、筛选得到的核酸适配体库可以特异性的结合于靶细胞表面的靶标蛋白分子,为适配体在寻找胶质瘤干细胞的生物标志物,以及胶质瘤的靶向载药、术后化疗、术中导航等研究领域的应用奠定了一定的基础。
【关键词】：胶质瘤干细胞 核酸适体 配体的指数富集系统进化 3D 培养
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英文缩略表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 胶质瘤干细胞的 3D培养11-24
• 1.1 引言11
• 1.2 实验材料11-12
• 1.3 实验方法12-15
• 1.3.1 细胞培养12-13
• 1.3.2 SU 8 模板的制作13
• 1.3.3 μCGA的制作13-14
• 1.3.4 单细胞增殖能力异质性分析14
• 1.3.5 胶质瘤干细胞的CD133及Nestin鉴定14-15
• 1.4 结果15-21
• 1.4.1 μCGA单细胞捕获15-16
• 1.4.2 μCGA单细胞长期培养可行性实验16
• 1.4.3 三维培养条件下的单细胞增殖能力异质性分析16-20
• 1.4.4 胶质瘤干细胞的鉴定20-21
• 1.5 讨论21-23
• 1.6 小结23-24
• 第二部分、胶质瘤干细胞核酸适体筛选及应用24-39
• 2.1 引言24-26
• 2.2 实验材料26-29
• 2.2.1 试剂与仪器26-28
• 2.2.2 DNA文库合成28-29
• 2.3 实验方法29-32
• 2.3.1 细胞培养29
• 2.3.2 胶质瘤干细胞的核酸适体筛选29-31
• 2.3.3 检测库的富集情况31-32
• 2.4 结果32-36
• 2.4.1 细胞培养32-33
• 2.4.2 琼脂糖电泳凝胶图33
• 2.4.3 流式细胞仪监测核酸适体的筛选进程33-34
• 2.4.4 富集库的亲和力测定34-36
• 2.5 讨论36-39
• 2.6 小结39
• 全文结论39-40
• 参考文献40-45
• 综述45-59
• 参考文献55-59
• 致谢59

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