HO-1、SOD2和Mfn2在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中的表达及丁苯酞保护作用的研究

发布时间：2017-06-27 23:14

  本文关键词：HO-1、SOD2和Mfn2在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中的表达及丁苯酞保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)是一种累及中枢神经系统(CNS)的慢性炎性脱髓鞘性疾病,其发病机制尚不明确。研究表明,氧化应激和线粒体损伤在MS的发病机制中起重要作用。本实验研究不同剂量丁苯酞对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脊髓组织中氧化应激指标HO-1和线粒体损伤标志物SOD2、Mfn2表达水平的影响。初步探讨丁苯酞对EAE小鼠神经功能障碍的保护作用及其可能的作用机制。方法:C57BL/6小鼠使用MOG35-55作为抗原免疫建立EAE模型。以神经功能评分2分及以上为模型成功,随机分为低剂量NBP组、高剂量NBP组、地塞米松组和EAE组,并设正常对照组。低剂量NBP组(LDN)、高剂量NBP组(HDN)小鼠分别腹腔注射丁苯酞80mg/kg/d、120mg/kg/d。地塞米松组(DXM)小鼠给予地塞米松磷酸钠注射液0.07mg/kg/d腹腔注射;正常对照组及EAE组小鼠每日腹腔注射等体积DMSO,共14天。分别于发病后第0天、第7天及第14天三个时间点观察C57BL/6小鼠自免疫后的精神状态、活动情况、发病情况及神经功能评分。随后处死小鼠取脊髓组织,以HE染色在光学显微镜下观察小鼠脊髓炎症细胞的浸润情况;以免疫组化方法观察小鼠脊髓腰膨大部位HO-1、SOD2及Mfn2的表达情况;黄嘌呤氧化法测定血清SOD的浓度;使用q RT-PCR方法测定小鼠脊髓腰膨大部位HO-1m RNA、SOD2m RNA以及Mfn2m RNA的表达水平。结果:1各组小鼠临床表现观察:正常对照组小鼠在整个实验中均正常,且体重逐渐增加。EAE组小鼠抗原免疫后出现精神萎靡、食欲下降、体重下降等表现。EAE组小鼠发病达高峰期时症状最严重,小鼠出现背部溃疡、四肢瘫痪及大小便失禁。低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组小鼠发病给予药物治疗后,与EAE组小鼠比较,体重下降程度较轻,临床症状表现相对较轻。2神经功能评分比较:计算各组中每只小鼠的最高神经功能评分的均数,并进行比较。EAE组小鼠神经功能评分高于低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组(P0.05)。高剂量NBP组神经功能评分明显低于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P0.05);低剂量NBP组与地塞米松组小鼠神经功能评分相比较,差异无统计学意义(P0.05)。3各组小鼠脊髓组织HO-1表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织HO-1m RNA表达水平、HO-1阳性细胞数明显增多,差异均具有统计学意义(P0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P0.05)。4各组小鼠脊髓组织SOD2表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织SOD2m RNA表达水平、SOD2阳性细胞数明显减少,差异均具有统计学意义(P0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P0.05)。5各组小鼠脊髓组织Mfn2表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织Mfn2m RNA表达水平、Mfn2阳性细胞数明显减少,差异均具有统计学意义(P0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P0.05)。6血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠血清SOD浓度明显增多,差异均具有统计学意义(P0.05)。低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组小鼠血清SOD浓度高于EAE组(P0.05);高剂量NBP组小鼠血清SOD浓度明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P0.05);低剂量NBP组与地塞米松组小鼠血清SOD浓度相比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:1 EAE发病早期就出现线粒体的损伤,丁苯酞与地塞米松均能降低EAE小鼠的神经功能障碍。2丁苯酞对于EAE小鼠神经功能缺失的保护作用存在剂量效应,大剂量丁苯酞能起到更好的神经保护作用。3丁苯酞对EAE小鼠的神经保护作用可能是通过增加抗氧化酶HO-1和线粒体中SOD2、Mfn2的水平来阻断ROS与线粒体损伤之间恶性循环,从减轻氧化应激以及保护线粒体二个方面对EAE小鼠起到神经保护作用。
【关键词】：多发性硬化 氧化应激 线粒体 丁苯酞 血红素加氧酶-1 线粒体融合蛋白2 超氧化物歧化酶2
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-23
• 附图23-33
• 附表33-36
• 讨论36-41
• 结论41-42
• 参考文献42-47
• 综述47-59
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 个人简历60

【参考文献】

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本文编号：491622