长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响和机制研究

发布时间：2017-07-20 11:19

  本文关键词：长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响和机制研究

  更多相关文章： LincRNA-p21 乏氧 周期凋亡 放射敏感性 自噬

【摘要】：目的:本研究通过建立稳定转染敲低长链基因间非编码RNA-p21(lincRNA-p21)的细胞株,探讨敲低lincRNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251MG经不同剂量X射线照射和乏氧(1%O2)培养不同时间后lincRNA-p21的表达。构建含lincRNA-p21 shRNA慢病毒载体,经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA-p21的SMMC7721和U251MG细胞株。MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测乏氧和常氧肿瘤细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移,克隆形成实验检测肿瘤细胞放射敏感性,MDC染色法和Western blot检测细胞自噬。结果:SMMC7721和U251MG细胞在2、4和6 Gy X射线照射后,lincRNA-p21表达随照射剂量增加逐渐升高。乏氧(1%O2)培养24和48 h,lincRNA-p21表达随培养时间递增。稳定转染lincRNA-p21 shRNA有效下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA-p21表达。乏氧(1%O2)培养48 h,敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251MG发生G2/M期阻滞,细胞凋亡明显增加,抑制细胞增殖和迁移。相比较而言,常氧条件下敲低lincRNA-p21对人肝癌细胞和胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡和迁移没有明显改变。敲低lincRNA-p21使乏氧肿瘤细胞中HIF-1α经泛素-蛋白酶体途径降解,GLUT1蛋白含量减少,并通过调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬,提高乏氧肿瘤细胞放射敏感性,放射增敏比(SER)约为1.23、1.31。而常氧条件下敲低lincRNA-p21不改变肿瘤细胞放射敏感性。过表达HIF-1α增加了敲低lincRNA-p21乏氧肿瘤细胞自噬水平,降低了细胞放射敏感性。结论:辐射损伤及乏氧均可提高SMMC7721和U251MG细胞中lincRNA-p21表达。敲低lincRNA-p21抑制增殖和迁移,提高了乏氧肿瘤细胞放射敏感性,可能与其诱导乏氧肿瘤细胞周期阻滞和凋亡,引发HIF-1α蛋白降解,调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬有关,可以作为放疗增敏靶点进一步研究。
【关键词】：LincRNA-p21 乏氧 周期凋亡 放射敏感性 自噬
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55;R735.7;R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-15
• 参考文献12-15
• 第一部分 LincRNA-p21辐射与乏氧诱导表达特性及其稳定敲低细胞系的建立15-28
• 材料和方法15-19
• 结果19-23
• 讨论23-26
• 参考文献26-28
• 第二部分 敲低长链基因间非编码RNA-p21乏氧肿瘤细胞表型变化的研究28-43
• 材料与方法28-30
• 结果30-36
• 讨论36-40
• 参考文献40-43
• 第三部分 敲低长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制研究43-62
• 材料和方法43-47
• 结果47-57
• 讨论57-60
• 参考文献60-62
• 结论62-63
• 综述 LincRNA-p21研究进展63-74
• 参考文献70-74
• 中英文对照缩略语词表74-75
• 攻读学位期间公开发表的论文75-76
• 致谢76-77

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本文编号：567776