基因工程猪β-干扰素生物学活性及三种JEV EDⅢ疫苗核酸佐剂效果研究

发布时间：2018-05-30 15:45

  本文选题：猪β干扰素 + Hsp70　； 参考：《南京农业大学》2010年硕士论文

【摘要】：日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV)引起的中枢神经系统的急性传染病。本病在世界许多国家广泛存在,不但对养猪业造成了巨大的经济损失,而且严重威胁着人类的健康。目前对乙型脑炎的治疗仍然没有行之有效的方法,而且对待本病主要还是以免疫接种疫苗的方式进行预防。现在世界上预防本病使用的疫苗主要是一些传统的灭活疫苗和弱毒疫,这些传统疫苗存在着一些自身的弊端,如灭活苗效果不是很强,减毒苗存在毒力返强的危险等。新型有效的乙脑疫苗的研究急需进行。同时,急需研制出安全、高效、新型的抗病毒和免疫增强剂用于增强机体的抵抗力和提高疫苗的保护率。干扰素和热休克蛋白70都是生物活性蛋白,在免疫反应中具有重要的作用。论文对猪β干扰素的生物学活性进行研究,并比较研究了两种细菌Hsp70和猪β干扰素作为核酸佐剂的免疫增强效果。本实验的研究内容包括以下几部分： 1重组载体的构建：研究猪p干扰素的生物学活性,我们构建了重组酵母表达载体pPICZαA-SwIFN-β,实现猪β干扰素在酵母中的分泌表达,为后续实验做准备；研究三种生物活性蛋白作为核酸佐剂对猪乙脑EDⅢ蛋白亚单位疫苗的免疫怎强效果,我们构建了三种重组真核表达载体pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70,为后续动物试验做准备。2本实验接着研究重组猪p-干扰素作为生物活性蛋白对乙型脑炎病毒的作用：研究猪p干扰素对猪乙型脑炎病毒在BHK-21细胞上复制的抑制,当干扰素含量为1000单位时能对BHK-21细胞起到50%的保护力。从实时定量PCR的结果表明当干扰素含量为10U时,并未表现出明显的病毒拷贝数减少,而1000U和105U时病毒拷贝数减少近10倍；选取猪p干扰素0.1ug、lug和10ug三个剂量作为猪乙脑EDⅢ蛋白亚单位疫苗的佐剂研究,经过一系列试验发现,高滴度的抗乙型脑炎病毒抗体和中和抗体出现在免疫了lug swIFN-β+TRX-EDIII的实验组,而免疫0.1ug swIFN-β+TRX-EDIII和10ug swIFN-β+TRX-EDIII两种剂量的实验组与对照组比并未出现明显的提高。对于诱导细胞因子而言,IFN-γ在免疫了lugswIFN-β+TRX-EDIII的实验动物中明显的高于其他实验组组,而重组猪p干扰素作为佐剂却不能明显的提高IL-4的诱导水平。实验说明猪β干扰素能抑制猪乙型脑炎病毒在BHK-21细胞上复制,同时猪p干扰素能作为有效的免疫佐剂增强猪乙脑EDⅢ蛋白亚单位疫苗的免疫效应,而且有剂量依赖关系。 3本实验将三种重组真核表达载体pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70分别与猪乙脑EDⅢ蛋白亚单位疫苗联合免疫无病原体猪,经过一些列检测试验发现：pCDNA3.0-SwIFN-p, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70均能诱导较强的免疫应答反应,抗体滴度及中和抗体等试验均显示H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能刺激强于猪β干扰素的免疫反应；细胞因子检测发现,H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能同时刺激IL-4和IFN-y的分泌表达,而猪β干扰素主要是刺激IFN-y的分泌表达,对IL-4分泌影响较小。但H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70之间无明显差异。本实验说明Hsp70针对JEV EDIII能诱导强于猪β干扰素的免疫应答反应,且诱导通路更全面,可能作为JEV EDIII亚单位疫苗的候选佐剂。
[Abstract]:Japanese encephalitis ( JE ) is an acute infectious disease of the central nervous system caused by Japanese encephalitis virus ( JEV ) .

1 . Construction of recombinant vector : To study the biological activity of porcine p - interferon , we constructed recombinant yeast expression vector pZ伪A - SwIFN - 尾 , which realized the secretion expression of porcine interferon - beta in yeast , and prepared for subsequent experiments ;
Three kinds of recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 were prepared .
A series of experiments showed that the anti - Japanese encephalitis virus antibody and neutralizing antibody were significantly higher than other experimental groups in the experimental animals immunized with lugswIFN - 尾 + trx - EDIII and 10ug swIFN - 尾 + trx - EDIII .

In this experiment , three recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 , respectively , were combined with the porcine encephalitis ED 鈪，

本文编号：1955839