青霉素G酰化酶基因的基因工程和定向进化研究

发布时间：2020-12-02 16:21

　　β-内酰胺抗生素的生产正经历一场从化学法制备向酶法制备转变的技术变革。青霉素G酰化酶（Penicillin G acylase, PGA）在酶法制备技术中处于核心地位。提高PGA的合成活力将推进β-内酰胺抗生素的酶法合成。目前基因序列已知的PGA分别来源于革兰氏阴性菌 （Alcaligenes faecalis （Af）, Escherichia coli （Ec）, Kluyvera citrophila （Kc）, Providencia rettgeri （Pr））以及革兰氏阳性菌（Bacillus megaterium （Bm） , Arthrobacter viscosus）。同属革兰氏阴性菌或者革兰氏阳性菌的PGA同源性较高，酶学性质接近。利用定向进化技术对pga基因进行随机突变和同源重组，有望获得具有更高合成活力和更高稳定性的新突变酶。论文第一章构建了PGA的枯草芽孢杆菌分泌表达系统。克隆了来源于Alcaligenes faecalis （CICC AS1.767）的pga基因（Genbank 登录号AF455356），该基因在枯草芽孢杆菌中实现了分泌表达。表达量较野生型... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海生命科学研究院)上海市

【文章页数】：67 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
引言
参考文献
第一章 Alcaligenesfaecalis青霉素G酰化酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达、纯化和性质研究
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
第二章 不同表达元件对枯草芽孢杆菌分泌表达青霉素G酰化酶的影响
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
第三章 突变Providenciarettgeri青霉素G酰化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
第四章 青霉素G酰化酶的噬菌体展示
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
第五章 DNA重排技术提高青霉素G酰化酶的合成活力
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
结论
参考文献
附录在学期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]雷氏普罗威登斯菌青霉素G酰化酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达[J]. 周政,张爱晖,周丽萍,杨晟,姜涌明,袁中一.  工业微生物. 2002(03)
[2]青霉素酰化酶活性中心的定点突变[J]. 戴明华,王恩多,谢雍,姜卫红,赵国屏.  生物化学与生物物理学报. 1999(05)
[3]巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶在枯草杆菌中的表达及其分离纯化[J]. 黄艳红,袁中一,王应睐.  中国生物化学与分子生物学报. 1999(01)



本文编号：2895543