Cathepsin基因家族与DVT早期诊断的实验研究

发布时间：2018-05-30 16:01

  本文选题：大鼠 + 深静脉血栓形成　； 参考：《昆明医学院》2010年硕士论文

【摘要】： 目的： 建立大鼠创伤性深静脉血栓模型,在血栓形成前、血栓形成后、血栓不形成等主要状态下,研究组织蛋白酶(cathepsin, cat)家族所有成员在血细胞转录层面的表达情况；分析其参与血管内皮细胞外基质降解、促进内皮细胞凋亡及抑制纤溶系统活性等促栓作用,筛选能够灵敏地早期诊断大鼠深静脉血栓形成的候选分子标志物。 方法： 1参见王兵博士论文《大鼠急性创伤性深静脉血栓模型建立及股静脉基因表达研究》中大鼠造模、分组及芯片检测方法,分析前期芯片数据,总结大鼠DVT过程中cathepsin基因家族在股静脉内皮细胞中的表达规律。 2查阅ncbi GenBank数据库和cnki数据库确定大鼠cathepsin基因家族成员,通过BLAST与人进行同源性比对,并查阅他们参与的生理功能。 3再次建立大鼠急性创伤性深静脉血栓模型,将100只SD大鼠根据观察时间和血栓形成情况进行如下分组：正常对照组(A组)、血栓形成初始期组(B组),血栓形成高峰期(C组)和无血栓形成组(D组)。提取各组血液总RNA并检测质量。 4对大鼠cathepsin基因家族所有成员,应用Oligo6.69引物设计软件,设计反转录引物,将各组大鼠血液总RNA反转录为cDNA. 5以GAPDH为内参照,采用半定量PCR检测cathepsin基因家族所有成员血栓形成前后的表达量,初步判断差异表达的基因,采用荧光实时定量PCR检测各组大鼠血细胞中已锁定的cathepsin基因的表达量。 6对实验数据进行处理、分析,并与其在血管内皮细胞中的表达变化作比较,通过其在深静脉血栓形成中的表达变化规律,结合其生理作用和参与其他疾病发生发展的机理,分析其在深静脉血栓形成网络中的地位和作用,筛选大鼠血细胞转录层面能够作为早期诊断DVT的候选分子标志物。 结果： 1分析前期的芯片数据,我们发现,该家族10个成员自创伤即刻到血栓形成高峰期在血管内皮细胞中都出现不同程度的表达上调,其中cathepsin B,cathepsin L，cathepsin S表达变化差异显著。考虑到该家族成员之间的基因、蛋白序列相似度较高,因而其功能较相似,推测该家族成员可能在DVT形成中发挥相似作用,与血栓形成密切相关。 2大鼠cathepsin基因家族18个成员如下：cathepsin 7,cathepsin 8,cathepsin A,cathepsin B,cathepsin C,cathepsin D, cathepsin E,cathepsin F,cathepsin G,cathepsin H,cathepsin K,cathepsin L1, cathepsin M, Cathepsin Q,cathepsin Q like 2,cathepsin R,cathepsin S,cathepsin W,大鼠与人cathepsin基因家族具有高度同源性,该家族主要参与抗原呈递、细胞凋亡、基质降解等生理过程,并涉及溶酶体通路和系统性红斑狼疮通路。 3再次大鼠造模成功,血栓形成率与前期无统计学差异,各组提取的血细胞RNA完整性和纯度均达到实时荧光定量PCR实验要求。 4 Cathepsin基因家族所有成员经半定量PCR检测,结果显示cathepsin A, B, C, D, E, F, G,H,K, L1,W在血栓形成前后具有差异表达,对它们进行real-timePCR检测,结果显示cathepsin B,cathepsin C在血栓形成高峰期组较血栓形成前组显著上调,而在血栓不形成组较血栓形成前组无显著变化。 5本次实验结果与前期芯片结果对比,在血栓形成过程中cathepsin B,cathepsin C在股静脉内皮细胞和血细胞中表达均呈上调趋势。内皮细胞损伤后,cathepsin B的高表达促使内皮细胞外基质降解、内皮细胞凋亡,进而内皮细胞功能障碍,从而放大内皮细胞的促凝活性,促进血栓形成和发展。首次提出二者可以作为大鼠深静脉血栓形成敏感的早期诊断候选分子标志物。结论： 1 Cathepsin家族与大鼠创伤性深静脉血栓形成密切相关。 2 Cathepsin家族通过降解内皮细胞外基质、促进内皮细胞凋亡、抑制纤溶系统等促进血栓形成和发展。 3 Cathepsin B, cathepsin C可以作为大鼠深静脉血栓形成早期诊断的候选分子标志物。
[Abstract]:Objective:
To establish a rat model of deep venous thrombosis, the expression of all members of the cathepsin (CAT) family at the transcription level of the blood cells was studied before the formation of thrombus, the formation of thrombus and the non formation of thrombus, and the analysis of its involvement in the degradation of the endothelial cell extracellular matrix, promoting the apoptosis of endothelial cells and inhibiting fibrinolysis. Screening for candidate biomarkers of deep vein thrombosis in rats can be sensitively diagnosed by systematic activity and embolic action.
Method锛，

本文编号：1955882