Ad-VEGF165的构建及体外转染大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的基础研究

发布时间：2018-06-01 01:36

  本文选题：血管内皮生长因子 + 血管内皮祖细胞　； 参考：《苏州大学》2008年硕士论文

【摘要】： 目的:构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),Ad-VEGF165体外转染大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞(EPCs),观察转染后细胞VEGF蛋白的表达情况以及重组腺病毒对EPCs生长的影响。 方法:利用pAdEasy系统构建携有血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒载体。HEK293A细胞包装、重组、扩增腺病毒颗粒,荧光显微镜下观察绿色荧光表达。对其进行PCR、基因测序鉴定。EGM-2MV培养基培养扩增大鼠骨髓源性EPCs。Ad-VEGF165体外转染EPCs,荧光显微镜下观察绿色荧光表达,激光共聚焦测转染效率,MTT法测MOI及对生长活性的影响,ELISA检测上清中VEGF的表达。 结果:经酶切鉴定、基因测序及绿色荧光观察说明成功构建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165成功转染EPCs,转染24 h后在荧光显微镜下可见绿色荧光,增殖实验及细胞形态观察证实1:50是合适的转染比率。当MOI为50时其转染效率为57.4%。ELISA法检测转染VEGF165后的EPCs其上清液中VEGF蛋白浓度明显升高。 结论:成功构建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165能有效转染EPCs。一定的转染比率对EPCs生长增殖有一定促进作用。转染后的EPCs高表达VEGF蛋白。
[Abstract]:Objective: to construct a recombinant adenovirus containing vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) and transfect Ad-VEGF165 into rat bone marrow-derived vascular endothelial progenitor cells in vitro to observe the expression of VEGF protein and the effect of recombinant adenovirus on the growth of EPCs. Methods: pAdEasy system was used to construct recombinant adenovirus vector, HEK293A, carrying vascular endothelial growth factor 165 (VEGF 165). Recombinant adenovirus particles were amplified and green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope. The EPCS were transfected with EPCS. Ad-VEGF165 from rat bone marrow in vitro, and the green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope. Measurement of transfection efficiency and MTT assay of moi and its effect on growth activity the expression of VEGF in supernatant was detected by Elisa. Results: the expression of VEGF in supernatant was determined by enzyme digestion. Gene sequencing and green fluorescence observation showed that Ad-VEGF165.Ad-VEGF165 was successfully transfected into EPCs, and green fluorescence was observed under fluorescence microscope for 24 h. The suitable transfection ratio was confirmed by proliferation experiment and cell morphology observation. When moi was 50, the transfection efficiency was 57.4. the concentration of VEGF protein in the supernatant of EPCs transfected with VEGF165 was detected by Elisa. Conclusion: Ad-VEGF165.Ad-VEGF165 can effectively transfect EPCs. A certain ratio of transfection can promote the growth and proliferation of EPCs. The transfected EPCs overexpressed VEGF protein.
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R329

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本文编号：1962353