抗氧化乳酸菌的筛选及其对氧化损伤的CT-26细胞的保护作用

发布时间：2018-06-03 19:08

  本文选题：抗氧化 + 乳酸菌　； 参考：《江南大学》2009年硕士论文

【摘要】： 目的:从乳酸发酵食品中分离筛选具有较高抗氧化活性的乳酸菌,研究其抗氧化能力并初步探讨其作用机制,为开发功能性乳制品提供理论依据。 方法:以体外清除DPPH的能力为指标,在相同菌量条件下,从32株受试菌株中筛选出具抗氧化活性的乳酸菌,正交实验优化其发酵条件,以最大程度上提高其抗氧化水平。小鼠结肠癌细胞CT-26传代培养后分为对照组、模型组和乳酸菌干预组。模型组用含0.45 mmol/L H2O2(终浓度)的RPMI-1640培养基作用于细胞2 h建立损伤模型,干预组将109cfu/mL的具抗氧化活性的乳酸菌与含0.45 mmol/L H2O2的RPMI-1640培养基于37℃孵育3 h,过滤除菌后取上清作用于细胞2 h,分别测定各组细胞活力(MTT法),测定上清液LDH、MDA及SOD含量,扫描电镜观察细胞表面形态,Hoechest 33342染色检测细胞核变化,HepG2细胞辅助验证受试菌对其保护作用。 结果:从受试的32株乳酸菌株中,筛选得到一株具有较强抗氧化能力的嗜酸乳杆菌874,DPPH清除率在35%左右。利用单因素实验,以发酵得到的菌体的DPPH清除率为指标,从接种量、培养基初始pH值、培养时间、培养温度、吐温种类、生长因子种类及添加量,碳、氮源种类及添加量等多个方面对筛得菌株的生长条件进行了优化,并就碳、氮源及生长因子(乳糖和豆芽汁)添加量等对清除DPPH自由基影响较大的因素进行了正交实验,确定了筛得菌株的优化培养基及最佳培养条件。优化培养基成分为乳糖1%,豆芽汁12.5%,葡萄糖2.5%,蛋白胨:牛肉浸膏=1:1,其余同MRS培养基。 最佳培养条件为:接种量为3%,培养基初始pH值为6.4,37℃下发酵20 h,吐温-80作为促生长因子。经优化后,菌株DPPH清除率由(35.15±0.49)%左右增至(66.70±0.42)%,清除羟自由基的能力由(19.60±0.99)%提高至(33.30±1.84)%,还原能力由(105.75±1.34)%增至(159.50±22.20)%。体外细胞培养研究结果表明:干预组细胞活力显著高于模型组(P0.01),培养上清液中LDH及MDA含量显著低于模型组(P0.01),SOD含量高于模型组(P0.01);扫描电镜下模型组细胞表面微绒毛消失,出现大量凋亡小体,干预组形态接近正常;模型组经Hoechst-33342荧光染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,干预组呈弥漫均匀荧光。 结论:筛选得到1株嗜酸乳酸菌,经优化其DPPH清除率达(66.70±0.42)%,羟自由基清除率为(33.30±1.84)%,还原能力为(159.50±22.20)%;完整菌体可保护细胞免受H2O2造成的氧化损伤,其作用机制可能与乳酸菌可以清除自由基(活性氧)等有关。
[Abstract]:Objective: to isolate and screen lactic acid bacteria with high antioxidant activity from lactic acid fermented food, to study its antioxidant ability and to explore its mechanism, and to provide theoretical basis for the development of functional dairy products. Methods: according to the ability of scavenging DPPH in vitro, lactic acid bacteria with antioxidant activity were screened from 32 tested strains under the same amount of bacteria, and the fermentation conditions were optimized by orthogonal experiment in order to improve the antioxidant level to the greatest extent. Mouse colon cancer cells were divided into control group, model group and lactobacillus intervention group after subculture of CT-26. The model group was treated with RPMI-1640 medium containing 0.45 mmol/L H _ 2O _ 2 (final concentration) for 2 h to establish the injury model. In the intervention group, lactic acid bacteria with antioxidant activity of 109cfu/mL and RPMI-1640 containing 0.45 mmol/L H2O2 were incubated for 3 h at 37 鈩，

本文编号：1973862