A类清道夫受体与葡萄糖调节蛋白78相互作用的研究

发布时间：2018-06-03 23:27

  本文选题：A类清道夫受体 + 葡萄糖调节蛋白78　； 参考：《南京医科大学》2008年博士论文

【摘要】： A类清道夫受体(Class A scavenger receptor,SR-A)是一种主要位于巨噬细胞表面的三聚体跨膜糖蛋白,能够识别多种配体。SR-A介导的对化学修饰的低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)的内吞可以导致巨噬细胞内脂质的聚集,并引起动脉粥样硬化。SR-A的胞浆结构域调节受体介导的脂质内吞、细胞黏附以及受体在细胞表面的表达等过程。 我们先期的研究表明,利用GST pull-down的方法可以找到一种与SR-A胞浆域特异性结合的的葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulatedprotein 78,GRP78)。在本研究中,利用免疫共沉淀的方法验证了在细胞裂解液中GRP78和SR-A的特异性结合。利用RNA干扰技术抑制GRP78表达水平,结果发现细胞SR-A表达水平没有受到影响,GRP78与SR-A的结合能力没有明显的改变,但是SR-A对乙酰化LDL(acLDL)的摄取能力降低。建立SR-A受体稳定表达的HEK293-SR-A细胞株,结果发现在有acLDL存在时,GRP78和SR-A在细胞内的结合减少,同时细胞对acLDL的内吞速率增加。利用免疫共沉淀结合二维电泳、质谱分析的方法进一步研究GRP78和SR-A的反应调节机制,发现细胞内有多个可能与GRP78和SR-A共同作用的蛋白质,提示它们可能在SR-A-GRP78反应通路中起一定作用。增加GRP78的表达水平可以使SR-A介导的肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌增加,这种调节作用可能与MAPK/ERK激酶(MAPK/ERKkinsase,MEK)-细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated proteinkinases,ERK)信号通路有关。本研究结果表明,GRP78可能在调节巨噬细胞SR-A的功能活性中发挥重要的作用。
[Abstract]:Class A scavenger receptor Class A scavenger receptor SR-A-) is a trimer transmembrane glycoprotein mainly located on the surface of macrophages. Endocytosis of chemically modified low density lipoprotein (LDLs) mediated by various ligands. SR-A can lead to lipid aggregation in macrophages and to the regulation of receptor mediated lipid endocytosis by the cytoplasmic domain of atherosclerosis. SR-A. Cell adhesion and receptor expression on cell surface. Our previous studies have shown that the GST pull-down method can be used to find a glucose-regulated protein, 78(Glucose regulatedprotein 78, GRP78, which specifically binds to the cytoplasmic domain of SR-A. In this study, the specific binding of GRP78 and SR-A in cell lysate was verified by immunoprecipitation. RNA interference technique was used to inhibit the expression of GRP78. The results showed that the expression of SR-A was not affected by the binding ability of GRP78 to SR-A, but the uptake ability of SR-A to acetylated LDLL was decreased. A HEK293-SR-A cell line with stable expression of SR-A receptor was established. It was found that in the presence of acLDL, the binding of GRP 78 and SR-A was decreased, and the endocytosis rate of acLDL was increased. Immunoprecipitation combined with two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry were used to further study the regulatory mechanism of GRP78 and SR-A reaction. It was found that there were many proteins in cells that might interact with GRP78 and SR-A. These results suggest that they may play a role in the SR-A-GRP78 response pathway. Increasing the expression of GRP78 can increase the secretion of TNF- 伪 mediated by SR-A, which may be related to the MAPK / ERKkinsase- extracellular regulated protein kinese-ERK signaling pathway. Our results suggest that GRP78 may play an important role in regulating the functional activity of SR-A in macrophages.
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R341

【共引文献】

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本文编号：1974712