重组H9N2禽流感病毒的构建及其在不同细胞中的复制特性

发布时间：2018-06-05 22:55

  本文选题：禽流感病毒 + 反向遗传学　； 参考：《基础医学与临床》2015年04期

【摘要】：目的利用反向遗传学技术构建具有感染性的H9N2亚型禽流感病毒,并揭示其在不同细胞中的复制特性。方法以A/Quail/Hong Kong/G1/97(H9N2)禽流感病毒基因组RNA为模板,用RT-PCR技术获得该病毒的8条完整基因片段,并分别将它们插入到p HW2000载体上,最终在293T细胞中包装产生重组H9N2病毒。并将重组的H9N2病毒感染不同细胞,观察病毒在不同细胞上的增殖状况来揭示该病毒在不同细胞上的复制特性。结果应用流感病毒8质粒反向遗传学技术,成功获得重组病毒,并揭示了该毒株在不同细胞(A549,MDCK,Vero)中的复制特性,发现A549人肺腺癌细胞更适宜H9N2病毒的正常复制。此外还分析总结了该毒株的与病毒毒力相关的重要位点特征。结论成功建立了H9N2禽流感病毒的反向遗传系统,该系统的建立为在分子水平研究H9N2病毒以及制备H9N2禽流感疫苗提供了依据。
[Abstract]:Objective to construct an infectious H9N2 subtype avian influenza virus by reverse genetics and to reveal its replication characteristics in different cells. Methods the genomic RNA of A/Quail/Hong KongG1 / 97 H9N2) avian influenza virus was used as a template. Eight complete gene fragments of the virus were obtained by RT-PCR technique and inserted into p HW2000 vector respectively. The recombinant H9N2 virus was finally packaged in 293T cells. The recombinant H9N2 virus was infected with different cells and the proliferation of the virus on different cells was observed to reveal the replication characteristics of the virus on different cells. Results Influenza virus 8 plasmid reverse genetics technique was used to obtain the recombinant virus successfully, and the replication characteristics of the virus strain in different cell lines A549MDCKG Verov were revealed. It was found that A549 human lung adenocarcinoma cells were more suitable for normal replication of H9N2 virus. In addition, the characteristics of virulence related to the virulence of the strain were analyzed and summarized. Conclusion the reverse genetic system of H9N2 avian influenza virus has been successfully established, which provides a basis for the molecular study of H9N2 virus and the preparation of H9N2 avian influenza vaccine.
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所;
【基金】：病毒性疾病感染组学关键技术平台十二五重大专项(2013ZX10004601-002)
【分类号】：R373.13

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本文编号：1983750