12H23单抗的嵌合型抗体的生物学活性分析及其模拟表位筛选
发布时间：2018-06-10 04:24
本文选题：12H23 + CH12 ； 参考：《复旦大学》2010年硕士论文
【摘要】： 表皮生长因子(EGFR)在肿瘤发生发展中起着重要的作用,已经成为肿瘤重要的治疗靶标。我们在前期研究中,通过杂交瘤技术制备了一个针对EGFRvⅢ的单克隆抗体12H23,研究表明它可以显著抑制表达EGFRvⅢ的肝癌的生长,我们随后对12H23进行了人鼠嵌合改造,获得了嵌合型单克隆抗体CHl2,初步研究表明,它基本保留了亲本抗体的结合活性。本研究将进一步对该抗体的生物学活性进行鉴定。 同时,由于被动的抗体免疫治疗应用于临床仍旧存在着一些限制,比如大规模生产的瓶颈,不够理想的疗效,多次免疫才能产生足够的效价等等。为了克服这些困难,我们研究并得到了能够结合CH12的模拟表位肽,并检测其免疫小鼠后是否能刺激小鼠产生类似抗体的活性。 第一部分12H23单抗的嵌合型抗体的生物学活性分析 【目的】：研究12H23单抗的嵌合抗体CH12的生物学活性。【方法】：125I标记法测定CH12单抗的亲和力和生物分布。通过体外的抗体依赖性细胞毒性试验(ADCC)分析12H23抗体对肝癌细胞的杀伤作用。用体内肝癌种植瘤模型,分析嵌合抗体CH12抗体的抑瘤作用。【结果】：CH12抗体与Huh7-EGFRvⅢ的亲和力为1.346 nm。CH12抗体在体内能富集到Huh7-EGFRvⅢ种植瘤中。12H23抗体在抗体依赖性细胞毒性实验中能有效的杀伤Huh7-EGFRvⅢ、U87-EGFRvⅢ细胞系。CH12抗体可显著抑制Huh7-EGFRvⅢ(外源性表达EGFRvⅢ)、SMMC-7721(内源性表达EGFRvⅢ)细胞种植瘤的生长,其抑瘤作用显著优于C225(西妥昔单抗)。【结论】：CH12是一个高亲和力抗体,它能有效抑制EGFRvⅢ阳性的肝癌种植瘤的生长,具有良好的临床应用潜力。 第二部分12H23单抗的模拟表位肽的筛选 【目的】：寻求能够结合12H23(或CH12)单抗的模拟表位肽。[方法]：我们使用了PH.D-12噬菌体展示文库技术来筛选12H23抗体的模拟表位肽。用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法及噬菌体竞争结合实验鉴定模拟表位肽是否能够有效的结合12H23单抗。[结果]：成功筛选到了两个模拟表位肽(其氨基酸序列分别为WHTEILKSYPHE和LPAFFVTNQTQD)。这两个多肽能与12H23单抗及CH806单抗较好地结合。在竞争实验中,模拟表位肽(WHTEILKSYPHE和LPAFFVTNQTQD)进一步证明了它们能够模拟12H23和CH806的天然表位。 【结论】：我们成功筛选得到了12H23的模拟表位肽。 第三部分12H23单抗模拟表位肽的免疫学活性分析 【目的】：检测12H23单抗模拟表位肽免疫机体后是否能够刺激机体主动免疫产生针对其天然表位的抗体。[方法]：我们将模拟表位肽偶联上钥孔P堆嫉鞍，
本文编号：2001964
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