小鼠子宫内膜细胞的分离培养及其对免疫细胞转化和分泌活性的影响

发布时间：2018-06-10 10:36

  本文选题：子宫内膜细胞 + 免疫细胞　； 参考：《西北农林科技大学》2009年硕士论文

【摘要】： 本试验建立了小鼠子宫内膜腺上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells, EECs)和基质细胞(Endometrial Stromal Cells, ESCs)的分离培养体系,探讨了小鼠子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离纯化方法,并研究了EECs和ESCs培养上清液对小鼠脾淋巴细胞、山羊和猪外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)转化和分泌活性的影响。为阐明子宫内膜细胞对免疫系统的影响提供试验依据,获得了以下结果: 1.小鼠子宫内膜经1.5 g/L胶原酶Ⅱ消化1.5 h,采用过滤-低速离心-自然沉降的方法分离单个细胞和团块样细胞团。将分离得到的单个细胞用含10%新生牛血清的D-MEM/F-12在37℃,体积分数为5%CO_2条件下培养。接种培养0.5 h后开始贴壁,细胞呈梭形和三角形,4 d左右可长成单层,波形蛋白检测阳性,角蛋白检测阴性,证明此为基质细胞,纯度达95%以上。将分离得到的葡萄串状腺团用含10%新生牛血清的D-MEM/F-12在37℃,体积分数为5%CO_2条件下培养。接种培养24 h后开始贴壁生长,腺团向外部扩散,生长2~3 d,细胞扩散并出现明显的铺路石状,4~5 d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长,细胞免疫组化染色角蛋白的阳性,纯度达95%以上。 2.证明小鼠EECs和ESCs培养上清液单独作用时能够显著刺激小鼠脾淋巴细胞以及山羊和猪的PBMC转化; EECs和ESCs培养上清液分别和植物血凝素(Phytohemagglutimin,PHA)混合作用时能够抑制PHA诱导的淋巴细胞和PBMC增殖作用。提示子宫内膜细胞可通过旁分泌作用影响淋巴细胞以及PBMC的活性,参与子宫免疫平衡的调节。 3.EEC和ESC培养上清单独作用既可无种属差异的刺激白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)分泌,又能刺激白介素4(Interleukin-4, IL-4)的分泌;EECs和ESCs培养上清液和PHA混合作用时抑制PHA诱导的IL-2的分泌,而促进PHA诱导的IL-4的分泌。提示EECs、ESCs对淋巴细胞的作用是非特异的,可能主要刺激Th2型细胞的活化和分泌功能,而抑制由抗原诱导的Th1型淋巴细胞的转化,这种作用在小鼠、猪、山羊之间没有种属差异。表明EECs、ESCs在子宫局部内分泌-免疫调节中可以发挥调节性作用,这种特性可能对于胚胎附植有重要意义。
[Abstract]:In this experiment, the isolation and culture systems of mouse endometrial epithelial cells (EECs) and stromal cells (ESCs) were established, and the methods of isolation and purification of mouse endometrial glandular epithelial cells and stromal cells were studied. The effects of EECs and ESCs culture supernatants on the transformation and secretion of peripheral blood mononuclear cells (PBMCCs) from mouse spleen lymphocytes, goat and pig peripheral blood mononuclear cells were studied. In order to elucidate the effect of endometrial cells on the immune system, the following results were obtained: 1. Mouse endometrium was digested by 1.5 g / L collagenase 鈪，

本文编号：2002916