内毒素对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

发布时间：2018-06-30 08:21

  本文选题：肝纤维化 + 枯否细胞　； 参考：《山西医科大学》2013年硕士论文

【摘要】：【目的】建立经济简便稳定的同步分离培养大鼠肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSCs)与枯否细胞(kupffercells，KCs)方法，为研究肝星状细胞、枯否细胞生物学特性及肝纤维化(HF)的发生机制提供细胞学方法基础。 【方法】采用链霉蛋白酶、Ⅳ型胶原酶离体灌流，10.387％与18.8％Nycodenz密度梯度高速(20000r/min)离心分离培养SD大鼠原代肝星状细胞、kupffer细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率。通过结蛋白(desmin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫细胞化学SABC法鉴定HSCs。采用溶菌酶(lysozyme)免疫细胞化学法与印度墨汁吞噬功能实验鉴定KCs。 【结果】成功同步分离培养大鼠HSCs、KCs，免疫细胞化学SABC法证实所分离的细胞分别为肝星状细胞和kupffer细胞，且kupffer细胞吞噬功能明显。每只大鼠的HSCs和KCs的细胞得率分别为2.0×107/肝和1.2×107/肝，平均纯度分别为93％、91％，活率分别为92％、94％。 【结论】本实验同步分离培养大鼠肝KCs和HSCs的方法简便经济，细胞得率、活率和纯度高，能用于肝纤维化机制的研究。 【目的】研究内毒素脂多糖(LPS)与其刺激的kupffer细胞(KCs)培养上清(KCCM)及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC，NF-kB通路抑制剂)对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响，探讨LPS刺激HSCs表达CTGF的机制。 【方法】培养72h的KCs经1mg/LLPS刺激48h后收集上清标记为KCCM1，未经LPS刺激的上清标记为KCCM0。将培养72h的HSCs随机分为空白对照组、KCCM0组、LPS组、KCCM1组、PDTC组、PDTC＋LPS组、PDTC＋KCCM1组。各组HSCs经相应的处理48h后，，westernblot检测各组HSCs表达CTGF水平，ELISA检测培养上清中Ⅰ型胶原含量。 【结果】各组HSCs中CTGF含量为：空白对照组(1.95±0.67)、KCCM0(2.15±1.10）、LPS(4.56±4.16）、KCCM1(5.21±3.23）、PDTC(0.06±0.02）、PDTC＋LPS(0.10±0.08）、PDTC＋KCCM1(2.77±4.08）。与空白对照组相比，LPS与KCCM1作用于HSCs后CTGF表达增加(P＜0.05），PDTC与PDTC＋LPS处理的HSCs中CTGF表达明显下降(P＜0.01）。PDTC与KCCM1联合比单独KCCM1作用于HSCs的CTGF表达减少(P＜0.05）。ELISA结果显示，KCCM1组HSCs上清中Ⅰ型胶原的含量增加(P＜0.05）。 【结论】LPS可直接通过HSCs内的NF-kB通路使其表达CTGF水平上调，LPS刺激的kupffer细胞还可能通过其它途经使HSCs表达CTGF水平上调。
[Abstract]:[objective] to establish a simple, convenient and stable method for simultaneous isolation and culture of hepatic stellate cells (HSCs) and Kupffer cells (KCs) from rat hepatic stellate cells (HSCs) in order to study hepatic stellate cells (HSCs). The biological characteristics of Kupffer cells and the mechanism of hepatic fibrosis (HF) provide the basis of cytological methods. [methods] Strepsin was used. Primary hepatic stellate cells of SD rats were isolated from 10.387% of type 鈪

本文编号：2085636