稳定表达GFP的Lewis肺癌干细胞的提取与初步鉴定

发布时间：2017-03-30 14:18

  本文关键词：稳定表达GFP的Lewis肺癌干细胞的提取与初步鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 1.用原位种植方法，建立可稳定遗传GFP（green fluorescent protein绿色荧光蛋白）的Lewis肺癌（LLC Lewis lung carcinoma）C57BL/6小鼠模型。 2．无血清条件培养基单克隆法培养获得Lewis肺癌细胞中的悬浮球细胞，并初步鉴定其生物学特性。 方法 1．建立原位种植小鼠模型：用matrigel胶分别包裹103、104、105个表达GFP的LLC亲代细胞原位种植于6-8周雌性C57BL/6小鼠，在第7天、14天、21天、28天每组分别解剖3只，使用Sellstrom Z87荧光护目镜和LDP470nm的蓝光手电筒直接快速地观察成瘤与转移，统计成瘤率与成瘤时间。 2．单克隆法并用无血清条件培养基获得LLC亲代细胞中的悬浮球细胞。 3．克隆球形成实验对比LLC成球细胞与LLC亲代细胞的体外增殖能力。 4．侵袭实验比较两种细胞的侵袭能力。 5．电镜对比两种细胞的形态差异。 6．成瘤实验比较两种细胞的致瘤力。 结果 1．三组小鼠成瘤均稳定表达GFP，成瘤率分别为25.00%、58.33%、91.67%，与剂量呈正相关（P0.01）；成瘤时间分别为（23.33±4.04）d、（21±5.72）d、（18.45±7.84）d，与剂量无明显关系（（P0.05），所有小鼠术后均苏醒并存活。 2．单克隆法、无血清条件培养基成功培养出LLC成球细胞，且可稳定传代，光镜下观察可见悬浮生长的中空细胞球，结构紧密。 3．克隆球形成实验结果显示LLC成球细胞的克隆形成率为（75.5±5.6）%，LLC亲代细胞的克隆形成率为(26.4±3.1)%，，两者有显著性统计学差异(P0.01)，LLC成球细胞的体外增殖能力明显大于LLC亲代细胞。 4．侵袭实验：侵袭实验结果显示LLC成球细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为259±26，LLC亲代细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为36±5，LLC成球细胞与LLC亲代细胞相比相对侵袭指数为6.43±2.75，LLC成球细胞穿膜数高于LLC亲代细胞(t=6.812，P 0.01)，LLC成球细胞较LLC亲代细胞具有更强的侵袭能力。 5．电镜结果显示LLC成球细胞形态核浆比例明显增大，细胞器稀少。 6．成瘤实验结果显示：LLC成球细胞在只种植100个细胞的情况下仍可成瘤，成瘤能力明显强于LLC亲代细胞。 结论 1．成功建立稳定表达GFP的lewis肺癌小鼠模型，可用于治疗肺癌药物的快速筛选。 2.无血清单克隆法成功培养出LLC悬浮球细胞，其增殖侵袭与致瘤能力明显强于LLC亲代细胞，具有肿瘤干细胞特性。
【关键词】：肺癌干细胞 悬浮球 动物模型 快速筛选 绿色荧光蛋白
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R734.2;R-332
【目录】：

• 符号说明5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-14
• 第一部分 稳定表达 GFP 的 C57 BL/6 小鼠 Lewis 肺癌模型的建立14-25
• 1 材料14-16
• 2 实验方法16-19
• 3 结果19-23
• 4 讨论23-24
• 小结24-25
• 第二部分 肺癌干细胞的提取与初步鉴定25-38
• 1 材料25-28
• 2 实验方法28-31
• 3 结果31-36
• 4 讨论36-37
• 小结37-38
• 全文总结38-39
• 参考文献39-42
• 文献综述42-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文50-51

【参考文献】

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1 张朝晖,陈锋,谭佑铭,让蔚清,张丹,罗招阳;烹调油烟致Balb/C小鼠肺癌的病理变化[J];中国公共卫生;2003年12期

2 宋玉华;彭鹏;邱少敏;徐月娟;;小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立和应用[J];江苏医药;2012年15期

  本文关键词：稳定表达GFP的Lewis肺癌干细胞的提取与初步鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：277338