线粒体融合蛋白2在姜黄素减轻脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡中的作用

发布时间：2020-11-16 22:03

　　 目的研究线粒体融合蛋白2(Mfn2)在姜黄素减轻脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡中的作用。方法将清洁级雄性Balb/c小鼠165只随机分为假手术组、脓毒症组、姜黄素干预组、姜黄素对照组、阴性病毒脓毒症组、阴性病毒姜黄素干预组、Mfn2干扰脓毒症组、Mfn2干扰姜黄素干预组,每组15只;剩余小鼠随机分为正常组、阴性病毒组、Mfn2干扰组,用于检测病毒转染效率,每组15只。脓毒症组及姜黄素干预组通过盲肠结扎穿孔术建立脓毒症小鼠模型,姜黄素干预组及姜黄素对照组予姜黄素200mg/(kg·d)灌胃1周,干扰组通过尾静脉注射携带相应干扰序列腺相关病毒建立模型,各组均于24h后处死小鼠,无菌留取脾脏,提取淋巴细胞。流式细胞术检测淋巴细胞凋亡情况以及线粒体膜电位,Western blot检测淋巴细胞Mfn2、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果与假手术相比,脓毒症组小鼠淋巴细胞Mfn2表达、Bcl-2/Bax明显降低(均P0.05),脓毒症组小鼠淋巴细胞凋亡率、Caspase-3表达、线粒体膜电位降低率明显升高(均P0.05)。姜黄素预处理后,与脓毒症组相比,Mfn2、Bcl-2/Bax表达均明显升高(均P0.05),淋巴细胞凋亡率、Caspase-3表达、线粒体膜电位降低率均明显降低(均P0.05)。下调Mfn2后,与脓毒症组相比,姜黄素干预组凋亡率及Caspase-3、Bcl-2/Bax表达水平均无统计学差异(均P0.05)。结论姜黄素抑制脓毒症小鼠的淋巴细胞凋亡,其作用依赖于Mfn2的表达。
【部分图文】：

黄素对照组与假手术组的差异无统计学意义（P＞0.05）（图3）。2.3姜黄素干预对脓毒症T淋巴细胞线粒体膜电位的影响经CLP造模后，脾脏淋巴细胞从原先的红光多聚体慢慢释放为绿光单体，差异有统计学意义（P＜0.05）。而姜黄素干预后发现，JC-1重新转化为红光多聚体，差异有统计学意义（P＜0.05），说明姜黄素干预后，造模后小鼠脾脏淋巴细胞凋亡明显减少（图4，插页）。2.4姜黄素对脓毒症小鼠T淋巴细胞Mfn2表达的影响脓毒症组小鼠在造模24h后取脾脏T淋巴细胞，Mfn2表达（0.473±0.579）较假手术组（2.576±1.139）明显图23组小鼠脾脏淋巴细胞Mfn2表达水平的比较（与正常组比较，*P＜0.05；与阴性对照组比较，△P＜0.05）Ｍfn2β-actin正常组阴性对照组Mfn2干扰组正常组阴性对照组Mfn2干扰组*△脾脏淋巴细胞Mfn2蛋白的表达水平0.80.60.40.20.0·1923·

浙江医学2019年第41卷第18期图5各组小鼠脾脏淋巴细胞的Mfn2表达水平（与假手术组比较，*P＜0.05；与脓毒症组比较，**P＜0.05）脾脏淋巴细胞凋亡率（%）6040200*△假手术组脓毒症组姜黄素干预组姜黄素对照组图3流式细胞术AnnexinV/PI双染法检测淋巴细胞凋亡（采取右上象限以及右下象限之和来比较各组间的凋亡差异；与假手术组比较，*P＜0.05；与脓毒症组比较，△P＜0.05）降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；姜黄素干预后，脓毒症组小鼠脾脏T淋巴细胞的Mfn2表达（2.489±0.874）较脓毒症组明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。而姜黄素对照组（2.034±1.337）小鼠脾脏T淋巴细胞的Mfn2表达与假手术组比较无统计学差异（P＞0.05）（图5）。2.5下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症中淋巴细胞凋亡作用的影响阴性病毒姜黄素组（25.347±4.099）与阴性病毒脓毒症组（45.507±4.527）比较仍有统计学差异（P＜0.01）。而Mfn2干扰姜黄素组（33.010±3.721）较Mfn2干扰脓毒症组（27.490±1.595）高，但差异无统计学意义。与阴性病毒脓毒症组比较，Mfn2干扰脓毒症组无统计学差异（图6），说明下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡作用的影响降低或者消失。阴性病毒姜黄素组线粒体膜电位降低率较阴性病毒脓毒症组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），而Mfn2干扰姜黄素组线粒体膜电位较Mfn2干扰脓毒症组稍有降低，但差异无统计学意义（图7，插页）。2.6下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症小鼠Caspase-3、Bcl-2/Bax表达的影响与假手术组Caspase-3（0.615±0.146）相比，脓毒症组（1.935±0.145）小鼠脾脏淋巴细胞的明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），姜黄素干预

浙江医学2019年第41卷第18期图5各组小鼠脾脏淋巴细胞的Mfn2表达水平（与假手术组比较，*P＜0.05；与脓毒症组比较，**P＜0.05）脾脏淋巴细胞凋亡率（%）6040200*△假手术组脓毒症组姜黄素干预组姜黄素对照组图3流式细胞术AnnexinV/PI双染法检测淋巴细胞凋亡（采取右上象限以及右下象限之和来比较各组间的凋亡差异；与假手术组比较，*P＜0.05；与脓毒症组比较，△P＜0.05）降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；姜黄素干预后，脓毒症组小鼠脾脏T淋巴细胞的Mfn2表达（2.489±0.874）较脓毒症组明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。而姜黄素对照组（2.034±1.337）小鼠脾脏T淋巴细胞的Mfn2表达与假手术组比较无统计学差异（P＞0.05）（图5）。2.5下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症中淋巴细胞凋亡作用的影响阴性病毒姜黄素组（25.347±4.099）与阴性病毒脓毒症组（45.507±4.527）比较仍有统计学差异（P＜0.01）。而Mfn2干扰姜黄素组（33.010±3.721）较Mfn2干扰脓毒症组（27.490±1.595）高，但差异无统计学意义。与阴性病毒脓毒症组比较，Mfn2干扰脓毒症组无统计学差异（图6），说明下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡作用的影响降低或者消失。阴性病毒姜黄素组线粒体膜电位降低率较阴性病毒脓毒症组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），而Mfn2干扰姜黄素组线粒体膜电位较Mfn2干扰脓毒症组稍有降低，但差异无统计学意义（图7，插页）。2.6下调Mfn2后，姜黄素对脓毒症小鼠Caspase-3、Bcl-2/Bax表达的影响与假手术组Caspase-3（0.615±0.146）相比，脓毒症组（1.935±0.145）小鼠脾脏淋巴细胞的明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），姜黄素干预
【参考文献】

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本文编号：2886724