含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究

发布时间：2020-11-21 17:07

　　 目的构建含小鼠FNDC5基因的绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3-FNDC5,并初步探索其对C2C12肌细胞的线粒体能量代谢的影响。方法应用反转录-聚合酶链反应法从小鼠腓肠肌和心脏组织中扩增出两端带有HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点的FNDC5编码片段,经回收、纯化酶切后,依次连接到质粒PM D19-T和p EGFP-C3上,获得过表达载体后转染至C2C12肌细胞,48 h后以激光共聚焦显微镜拍摄线粒体荧光强度,以荧光定量PCR检测与线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达情况。结果 PCR及测序结果表明:重组质粒p EGFP-C3含有FNDC5段,方向及大小正确,过表达FNDC5可以增强线粒体荧光强度,并增加线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达。结论成功构建了小鼠真核表达载体p EGFP-C3-FNDC5,过表达FNDC5可以增强线粒体能量代谢。
【文章目录】：
1材料与方法
    1.1质粒、菌株及试剂
    1.2引物设计
    1.3小鼠FNDC5基因的扩增与纯化
    1.4克隆载体PMDT-FNDC5的构建及其鉴定
    1.5真核表达载体pEGFP-C3-FNDC5的构建与鉴定
    1.6荧光定量PCR检测
    1.7线粒体含量染色
    1.8统计学处理
2结果
    2.1FNDC5基因片段的扩增
    2.2重组质粒PMDT-FNDC5的筛选鉴定
    2.3重组质粒pEGFP-C3-FNDC5的筛选鉴定
    2.4重组质粒pEGFP-C3-FNDC5可以过表达FNDC
    2.5过表达FNDC5可以增加线粒体含量
    2.6过表达FNDC5可以增强线粒体能量代谢相关基因的表达
3结论

【共引文献】

相关期刊论文 前8条

1 汪凯;任安经;章卫平;;米色脂肪:一种新型的脂肪[J];第二军医大学学报;2014年02期

2 莫显刚;冯健;张莉;江凤;向凝;郑淑展;杨涓;罗兴梅;张洛超;王龙;;心力衰竭患者循环Irisin水平与心功能的相关性研究[J];临床心血管病杂志;2015年08期

3 袁红;张淑芳;贾绍辉;陈宁;;Irisin在运动干预对于肥胖的预防与治疗中的作用[J];湖北科技学院学报(医学版);2014年04期

4 谢心苗;于雪梅;;Irisin与胰岛素抵抗相关疾病[J];临床与病理杂志;2014年04期

5 牛尚梅;宋光耀;马慧娟;;Irisin调节代谢的研究进展[J];医学综述;2014年19期

6 周伟;陈俊;;运动与PGC-1α依赖性肌肉因子鸢尾素研究进展[J];中国运动医学杂志;2014年07期

7 艾华;谢岚;;运动对鸢尾素影响研究进展[J];中国运动医学杂志;2014年12期

8 贺晓玉;;运动对肌肉因子Irisin表达影响的研究进展[J];中国康复医学杂志;2015年03期

相关硕士学位论文 前3条

1 黄卫东;FNDC5的制备及对2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响[D];第四军医大学;2014年

2 林洁;Irisin蛋白在多囊卵巢综合征大鼠代谢中的作用研究[D];福建医科大学;2014年

3 田文葭;2型糖尿病患者血清irisin水平及其与胰岛素抵抗相关性的研究[D];浙江大学;2015年

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 高全文,董绍忠,陈希哲,陈琰,杨连甲;人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年01期

2 廖荣霞,孙建国,陈正堂,周建新;小鼠肝脏特异的微RNA真核表达载体的构建及鉴定[J];重庆医学;2004年07期

3 代芳,王佑民,王长江,佘其美,周剑,时照明,胡红琳;人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定[J];安徽医科大学学报;2004年06期

4 吴波;陈秉;熊群英;容振勤;张伟林;李永浩;;人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体构建[J];医学研究杂志;2006年01期

5 邓兴力;杨智勇;董坚;王廷华;徐丹;冯忠堂;;大鼠脑源性神经营养因子基因克隆及其真核表达载体的构建[J];医药论坛杂志;2008年06期

6 张斌;王代友;;癌胚抗原基因真核表达载体的构建[J];临床口腔医学杂志;2009年04期

7 吴囡;卢颖;佟伟;张逸博;吴学敏;李会;;人α防御素5真核表达载体的构建[J];现代预防医学;2010年22期

8 罗果;白国辉;邓宏宇;;重组人白介素27真核表达载体的构建[J];遵义医学院学报;2011年03期

9 王勇;王志中;钟兵;王恒;邹庆华;陈渝;;真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR的构建与鉴定(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年41期

10 万兵,张利宁,马春红,宋静,曹英林,李长菲,孙汶生;人4-1BB-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建[J];山东医科大学学报;2002年01期

相关博士学位论文 前4条

1 张守纯;p16真核表达载体的构建及其转基因的研究[D];中国医科大学;2004年

2 王小芳;重组肾上腺髓质素真核表达载体的构建及实验研究[D];复旦大学;2004年

3 张越;SLC34A2基因真核表达载体的构建及其转染人肺泡上皮细胞的实验研究[D];吉林大学;2008年

4 杜德伟;丙型肝炎病毒的受体研究——B族Ⅰ型清道夫受体介导HCV入胞作用的研究[D];第四军医大学;2004年

相关硕士学位论文 前10条

1 卢春生;人骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建[D];广州医学院;2009年

2 班亚珂;人亲磷脂酸磷脂酶A1β亚型基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建[D];桂林医学院;2013年

3 张立华;人表皮生长因子基因真核表达载体构建及基因转染[D];郑州大学;2004年

4 宋晓妍;人生长激素真核表达载体的构建及其瞬时表达[D];郑州大学;2006年

5 陈姗姗;miR-122真核表达载体的构建、体外转录及其活性的鉴定[D];华中科技大学;2008年

6 贺玉君;人源胸腺素原—白介素融合蛋白基因克隆及其真核表达载体的构建[D];广西师范大学;2004年

7 朱晓燕;组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）真核表达载体的构建[D];郑州大学;2003年

8 丁健;人类CD154反义RNA真核表达载体的构建及其对Jurkat细胞CD154表达的影响[D];福建医科大学;2002年

9 钟利;甲型流感病毒NP基因真核表达载体的构建及其免疫效果研究[D];四川大学;2007年

10 詹升华;人促甲状腺激素受体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达[D];重庆医科大学;2004年

本文编号：2893325