肺炎链球菌ClpE相互作用蛋白的筛选鉴定

发布时间：2020-12-04 13:23

　　目的HSP100/ClpATPase是一类高度保守而且广泛存在的热休克蛋白（heat shockprotein, HSP），属于AAA+（ATPase associated with diverse cellular activities）蛋白超家族，具有多种生物学功能。他们可以与蛋白酶ClpP结合形成ATP依赖的蛋白酶复合体促进特异的底物蛋白质的水解，而ClpATPase决定了ClpP的裂解功能和降解底物的特异性[3]。大量研究已证实ClpATPase在许多病原菌的致病过程中发挥了重要作用。在金黄色葡萄球菌，ClpX缺陷株的毒力显著降低，这种作用主要是通过调节主要毒力因子的表达来实现的[8]。在单核细胞增多性李斯特菌，ClpC通过调节侵袭相关毒力因子的表达参与细菌粘附侵袭宿主细胞的过程[10]。我们课题组前期对肺炎链球菌ClpE的研究发现：在小鼠腹腔感染模型clpE缺陷肺炎链球菌的致病能力明显降低。那么ClpE影响细菌致病的机制如何呢？即它是通过对哪些毒力因子的影响作用而调控细菌相应的毒力表现呢？要想弄清这些问题，就必须寻找到与ClpE有相互作用的特异性蛋白底物。本研究拟通过目前应用... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

ClpEPCR扩增产物

图 1 ClpE PCR 扩增产物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker图 2 重组表达载体的双酶pET28a-ClpE，泳道 2：Fig.2 Identification of the Lane 1: pET28a-ClpE digested by EcoRI/SalI M2.2 rClpE 的大肠杆菌表达与纯化与未诱导菌相比，含重组质粒 pET28a-ClpE 的 BL21 菌增粗的蛋白条带，位置在 80kDa 左右，与预期相符（图 3的形式存在。采用镍柱亲和层析纯化后，SDS-PAGE 显示（图 4），纯度在 85%左右，超滤除咪唑后可用于多克隆抗

图 1 ClpE PCR 扩增产物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker图 2 重pET28Fig.2 ILane digeste2.2 rClpE 的大肠杆菌表达与纯化与未诱导菌相比，含重组质粒 pET28增粗的蛋白条带，位置在 80kDa 左右，的形式存在。采用镍柱亲和层析纯化后，（图 4），纯度在 85%左右，超滤除咪唑

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用限制性显示PCR技术构建细菌poly(A)化mRNA的cDNA文库[J]. 胡子有,马文丽,宋艳斌,张宝,郑文岭.  生物技术通讯. 2002(04)



本文编号：2897682