模拟表位结合夹心化学发光法检测抗A和抗B效价

发布时间：2020-12-08 04:11

　　目的:获得A/B血型抗原的模拟多肽,并将其与夹心化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay, CLIA）相结合,以开发更有效的方法来测量A/B抗体的效价。方法:分别用NaM87-1F6和HEB-29对噬菌体12肽库进行三轮淘选。对经酶联免疫吸附实验（ELISA）确定的阳性菌斑进行测序分析,根据其氨基酸组成合成模拟多肽,并通过竞争性ELISA、凝集抑制等方法检测其抗原性。随后将获得的模拟多肽与CLIA结合,检测A、B抗体效价,制作标准曲线以及与现有的微柱凝胶法（CAT）进行相关性对比。结果:经过三轮淘选和相关鉴定后得到13个与抗A抗体和19个与抗B抗体特异性相互作用的噬菌体克隆,其中分别有9个（MTRIQLRMMRLH）和12个（PQMSRHRMRMLP）展示相同的氨基酸序列,据此合成的多肽分别命名为MTR和PQM。竞争性ELISA结果表明,MTR能够特异性拮抗A抗体和A抗原的替代多肽的免疫结合;PQM能够特异性拮抗B抗体和B抗原的替代多肽的免疫结合。凝集抑制实验表明MTR/PQM可以特异性抑制A/B型红细胞与抗A/B之间的相互作用。结合模拟肽的夹心CL... 

【文章来源】：现代生物医学进展. 2019年15期 第2822-2828页

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 噬菌体展示Ph.D.-12肽库的生物淘选
        1.2.2 选择和扩增阳性噬菌体克隆
        1.2.3 ELISA检测阳性噬菌体克隆
        1.2.4 DNA测序以及多肽合成
        1.2.5 竞争性ELISA检测合成多肽
        1.2.6 红细胞凝集抑制实验
        1.2.7 化学发光免疫分析
        1.2.8 微柱凝胶法
        1.2.9 标准曲线
    1.3 统计分析
2 结果
    2.1 特异性噬菌体淘选的富集率
    2.2 噬菌体克隆与对应单抗的亲和力
    2.3 测序结果
    2.4 合成多肽与天然A,B抗原具有相同的抗原性
    2.5 合成抗原能够抑制红细胞与对应抗体的结合
    2.6 化学发光方法
    2.7 CLIA与CAT结果的相关性
3 讨论



本文编号：2904432