三丁基氯化锡诱导下丘脑神经元细胞凋亡的模型研究
发布时间：2021-01-05 19:02
目的:建立三丁基氯化锡（TBTC）诱导的新生雌性大鼠下丘脑神经元细胞凋亡模型,并探讨相关机制。方法:取新生24 h以内的雌性SD大鼠,分离下丘脑神经元细胞进行原代培养。免疫荧光染色法鉴定下丘脑神经元纯度后,分别暴露于含不同浓度TBTC（0、100、150、200、250、300μg/L）的培养基中。孵育24 h后,CCK-8检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态,透射电镜观察细胞形态的改变,Western blot检测凋亡相关蛋白JNK、p-JNK的表达。结果:免疫荧光染色鉴定神经元纯度约为92.23%。与TBTC 0μg/L组相比,各浓度TBTC干预24 h对下丘脑神经元细胞的生长均有抑制作用,其相对存活率均显著降低（P<0.01）,且呈浓度依赖性;与TBTC 0μg/L组相比,不同浓度的TBTC作用24 h后,下丘脑神经元细胞均出现不同程度的细胞凋亡,其细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）,且呈浓度依赖性。Hoechst 33258染色显示,TBTC 150μg/L组下丘脑神经元细胞核呈致密浓染的高强度蓝色荧...
【文章来源】：上海中医药大学学报. 2019,33(04)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
免疫荧光染色鉴定下丘脑神经元细胞(×200)2．2TBTC对下丘脑神经元细胞增殖的影响与
上海中医药大学学报第33卷第4期2019年7月GFAP标记的神经胶质细胞呈红色荧光;490nm蓝色光激发β-tubulinⅢ标记的胞浆和突触呈绿色荧光;390nm紫外光激发DAPI标记的细胞核呈蓝色荧光;后两者融合即为神经元细胞。见图1。免疫染色的细胞形态与荧光倒置显微镜下观察一致。随机选取10个视野计数，测得神经元纯度约为92．23%。图1免疫荧光染色鉴定下丘脑神经元细胞(×200)2．2TBTC对下丘脑神经元细胞增殖的影响与TBTC0μg/L组比较，各浓度TBTC干预24h对下丘脑神经元细胞的生长均有抑制作用，其相对存活率均显著降低(P＜0．01)，且呈浓度依赖性。其中，150μg/LTBTC作用24h，下丘脑神经元细胞增殖抑制率为(44．7±4．5)%。见图2。2．3TBTC对下丘脑神经元细胞凋亡的影响与TBTC0μg/L组比较，不同浓度的TBTC作用24h后，下丘脑神经元细胞均出现不同程度的细胞凋亡，其细胞凋亡率均显著升高(P＜0．01)，且呈浓度依赖性。其中，150μg/LTBTC作用24h，下丘脑神经元细胞的凋亡率为(42．6±6．6)%。综合细胞增殖与细胞凋亡的实验结果，选取TBTC150μg/L作为诱与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图2TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞存活率(n=6，x－±s)导下丘脑神经元细胞凋亡模型的药物浓度进行后续实验。见图3、图4。图3TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞凋亡情况·75·
AcademicJournalofShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicineVol．33No．4Jul．2019与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图4TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞凋亡率(n=3，x－±s)Hoechst33258染色后，TBTC0μg/L组下丘脑神经元细胞的细胞核呈现均匀分布的低强度蓝色荧光。与TBTC0μg/L组相比，TBTC150μg/L组下丘脑神经元细胞呈致密浓染的高强度蓝色荧光，细胞核出现固缩态和颗粒状改变，可见明显的凋亡形态。见图5。2．4TBTC对下丘脑神经元细胞形态的影响透射电镜观察显示，TBTC0μg/L组细胞形态规则，细胞图5TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞形态(Hoechst33258染色，×500)膜饱满，双层核膜完整，细胞核内染色质均匀分布;TBTC150μg/L组细胞与周围细胞脱离，细胞核固缩并发生裂解，染色质边集化呈“新月状”，细胞膜内陷或出芽形成小泡，将细胞分割成多个有膜包绕的凋亡小体。见图6。2．5TBTC对下丘脑神经元细胞JNK表达的影响与TBTC0μg/L组相比，TBTC150μg/L组p-JNK蛋白表达显著增多，p-JNK/JNK蛋白表达比值显著上调(P＜0．01)。见图7。图6TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞形态(透射电镜)与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图7TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞JNK表达(n=3，x－±s)·85·
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药调更汤改善围绝经期综合征患者阴阳失衡状态89例临床观察[J]. 桑珍,徐莲薇. 江苏中医药. 2006(07)
[2]Effects of Zuogui Wan on neurocyte apoptosis and down-regulation of TGF-β1 expression in nuclei of arcuate hypothalamus of monosodium glutamate-liver regeneration rats[J]. Han-Min Li Xiang Gao Mu-Lan Yang Jia-Jun Mei Liu-Tong Zhang Xing-Fan Qiu Hepatopathy Institute,Affiliated Hospital of Hubei Traditional Chinese Medicine College,Wuhan 430061,Hubei Province,ChinaUltramicropathology Laboratory,Tongji Medicine College,Huazhong Scientific University,Wuhan 430030,Hubei Province,ChinaHubei Traditional Chinese Medicine College,Wuhan 430061,Hubei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(19)
[3]从肝肾论治更年期综合征45例[J]. 徐莲薇,孙卓君. 上海中医药杂志. 2003(10)
本文编号：2959136
【文章来源】：上海中医药大学学报. 2019,33(04)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
免疫荧光染色鉴定下丘脑神经元细胞(×200)2．2TBTC对下丘脑神经元细胞增殖的影响与
上海中医药大学学报第33卷第4期2019年7月GFAP标记的神经胶质细胞呈红色荧光;490nm蓝色光激发β-tubulinⅢ标记的胞浆和突触呈绿色荧光;390nm紫外光激发DAPI标记的细胞核呈蓝色荧光;后两者融合即为神经元细胞。见图1。免疫染色的细胞形态与荧光倒置显微镜下观察一致。随机选取10个视野计数，测得神经元纯度约为92．23%。图1免疫荧光染色鉴定下丘脑神经元细胞(×200)2．2TBTC对下丘脑神经元细胞增殖的影响与TBTC0μg/L组比较，各浓度TBTC干预24h对下丘脑神经元细胞的生长均有抑制作用，其相对存活率均显著降低(P＜0．01)，且呈浓度依赖性。其中，150μg/LTBTC作用24h，下丘脑神经元细胞增殖抑制率为(44．7±4．5)%。见图2。2．3TBTC对下丘脑神经元细胞凋亡的影响与TBTC0μg/L组比较，不同浓度的TBTC作用24h后，下丘脑神经元细胞均出现不同程度的细胞凋亡，其细胞凋亡率均显著升高(P＜0．01)，且呈浓度依赖性。其中，150μg/LTBTC作用24h，下丘脑神经元细胞的凋亡率为(42．6±6．6)%。综合细胞增殖与细胞凋亡的实验结果，选取TBTC150μg/L作为诱与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图2TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞存活率(n=6，x－±s)导下丘脑神经元细胞凋亡模型的药物浓度进行后续实验。见图3、图4。图3TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞凋亡情况·75·
AcademicJournalofShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicineVol．33No．4Jul．2019与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图4TBTC各浓度组下丘脑神经元细胞凋亡率(n=3，x－±s)Hoechst33258染色后，TBTC0μg/L组下丘脑神经元细胞的细胞核呈现均匀分布的低强度蓝色荧光。与TBTC0μg/L组相比，TBTC150μg/L组下丘脑神经元细胞呈致密浓染的高强度蓝色荧光，细胞核出现固缩态和颗粒状改变，可见明显的凋亡形态。见图5。2．4TBTC对下丘脑神经元细胞形态的影响透射电镜观察显示，TBTC0μg/L组细胞形态规则，细胞图5TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞形态(Hoechst33258染色，×500)膜饱满，双层核膜完整，细胞核内染色质均匀分布;TBTC150μg/L组细胞与周围细胞脱离，细胞核固缩并发生裂解，染色质边集化呈“新月状”，细胞膜内陷或出芽形成小泡，将细胞分割成多个有膜包绕的凋亡小体。见图6。2．5TBTC对下丘脑神经元细胞JNK表达的影响与TBTC0μg/L组相比，TBTC150μg/L组p-JNK蛋白表达显著增多，p-JNK/JNK蛋白表达比值显著上调(P＜0．01)。见图7。图6TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞形态(透射电镜)与TBTC0μg/L组比较，＊＊P＜0．01图7TBTC0μg/L及150μg/L组下丘脑神经元细胞JNK表达(n=3，x－±s)·85·
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药调更汤改善围绝经期综合征患者阴阳失衡状态89例临床观察[J]. 桑珍,徐莲薇. 江苏中医药. 2006(07)
[2]Effects of Zuogui Wan on neurocyte apoptosis and down-regulation of TGF-β1 expression in nuclei of arcuate hypothalamus of monosodium glutamate-liver regeneration rats[J]. Han-Min Li Xiang Gao Mu-Lan Yang Jia-Jun Mei Liu-Tong Zhang Xing-Fan Qiu Hepatopathy Institute,Affiliated Hospital of Hubei Traditional Chinese Medicine College,Wuhan 430061,Hubei Province,ChinaUltramicropathology Laboratory,Tongji Medicine College,Huazhong Scientific University,Wuhan 430030,Hubei Province,ChinaHubei Traditional Chinese Medicine College,Wuhan 430061,Hubei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2004(19)
[3]从肝肾论治更年期综合征45例[J]. 徐莲薇,孙卓君. 上海中医药杂志. 2003(10)
本文编号：2959136
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