红色毛癣菌pho88基因的克隆及生物信息学分析

发布时间：2023-11-23 20:52

　　[目的]克隆红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)无机磷酸盐转运蛋白(Inorganic phosphate transporter,PHO88)基因,构建原核表达质粒,并对PHO88蛋白进行生物信息学分析。[方法]根据Gen Bank公布的T. rubrum CBS 118892菌株pho88基因序列(XP-003235348),设计合成特异性引物,提取红色毛癣菌总RNA,反转录为c DNA,PCR扩增pho88基因,构建到原核表达载体p ET-28a上,测序鉴定其序列,并对其进行生物信息学分析。[结果]红色毛癣菌pho88基因全长582 bp,编码193个氨基酸。PHO88蛋白含有1个跨膜结构域,细胞亚定位为分泌信号途径蛋白,PHO88含有16个磷酸化修饰位点,其二级结构主要由α-螺旋构成,高级结构为全α型蛋白质。[结论]成功克隆红色毛癣菌pho88基因及构建原核表达质粒,为后续PHO88蛋白的诱导表达奠定基础,为后续开发靶向PHO88的抗真菌药物,提供实验基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 红色毛癣菌总RNA的提取及cDNA第一链合成
        1.2.2 引物设计
        1.2.3 pho88基因的扩增
        1.2.4 重组原核表达质粒的构建
        1.2.5 生物信息学分析
2 结果与分析
    2.1 红色毛癣菌总RNA提取及cDNA第一链合成
    2.2 pho88基因的扩增
    2.3 重组原核表达质粒的构建和鉴定
    2.4 Pho88蛋白生物信息学分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3866190