抗辐射菌DNA修复蛋白LexA的表达，纯化和鉴定

发布时间：2024-01-24 18:16

　　抗辐射菌Deinoeoccus radiodurans(Dr)是一种对电离辐射，紫外线及其他一些DNA损伤剂具有显著抗性的微球菌。该菌能在辐照后几小时内准确无误地修复每条染色体上至少150多个DNA双链断裂(DSB)。已有的研究表明该独特抗性归功于其高效精确的DNA损伤修复能力。然而，对其修复路径及机制知之甚少。D.radiodurans中是否存在SOS修复路径，及在E.coli等菌中广泛存在的LexA修复蛋白在D.radiodurans 中的功能特性如何均是未解之迷。本研究利用已克隆构建的D.radiodurans lexA基因重组质粒pZA172，转化大肠杆菌JM109并在IPTG诱导下获得了高效表达，Dr LexA分子量约25.4KDa。实验表明IPTG浓度为0.1 mM，诱导时间为24 h时LexA蛋白表达效果最佳。大体积培养表达菌时，氨苄青霉素浓度为25 μg／ml及IPTG诱导浓度为0.1mM时，LexA表达量较高。 我们对表达产物进行了纯化并进一步研究了纯化LexA的功能特性。培养细胞经溶菌酶，反复冻融，超声等裂解破膜后，再通过高速离心，层析，超滤浓缩等技术使Le...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：博士

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前言（研究背景）
第一部分 D．radiodurans lexA的表达及其表达产物的纯化
第二部分 D．radiodurans LexA蛋白DNA结合位点分析
第三部分 电离辐射对D．radiodurans LexA蛋白表达水平的影响
第四部分 RecA激活的D．radiodurans LexA蛋白降解及其自动降解
第五部分 D．radiodurans pprA,orf144c,lexA基因突变株的构建
第六部分 D．radiodurans LexA基因突变体的性质
结论
图表
参考文献
附录1 致谢
附录2 博士期间发表论文目录



本文编号：3884232