汉滩病毒重组腺病毒疫苗的基础研究

发布时间：2024-03-09 09:37

　　目的：构建汉滩病毒重组腺病毒疫苗并分析其诱导的免疫效果，探索发展新型 的汉滩病毒疫苗。 方法： 1． 分别扩增和克隆汉滩病毒的M基因、G1和G2基因并进行序列分析。用杆状 病毒载体表达上述基因编码的重组蛋白。 2． 用腺病毒载体构建重组腺病毒vAd-G1、 vAd-G2及vAd-M，用Western blotting等方法鉴定目的基因的表达。 3． 采用重组腺病毒单独免疫、重组腺病毒与DNA疫苗联合免疫的方法接种小 鼠，用ELISA、ELISPOT、流式细胞分析等技术观察诱导的体液免疫、细胞免疫和黏 膜免疫反应。用表达汉滩病毒M片段的重组痘病毒攻击免疫的地鼠，分析重组腺病 毒疫苗诱导的保护效果。 结果： 1． 用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达了汉滩病毒G1和G2蛋白。表达 的重组蛋白与病人血清和用灭活病毒免疫的兔血清均发生特异性反应。结果表明， 表达的蛋白具有良好的抗原性。 2． 汉滩病毒重组腺病毒疫苗免疫动物能诱导特异的免疫应答。重组腺病毒 vAd-M诱导出较高水平的中和抗体和细胞免疫应答。重组腺病毒单独或与重组DNA 疫苗联合免疫小鼠，均能诱导出特异的体液免疫、细胞免疫和黏膜...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1一1PCR扩增76一118株M、Gl及GZ片段

R鉴定阳性克隆，提取质粒DNA，酶切分析鉴明书进行。将所得到的重组质粒分别命名为析定的阳性克隆各取两个进行序列测定，测序生物公司进行。因的PCR扩增76一118株M片段全长3616bp，为单一的开放胶电泳，结果表明，所扩增的M片段全长约扩增长度约1.4Kb，均与理论推测结果一致。....

图1一2阳性克隆的酶切鉴定

6.76一11SM500bP图1一1PCR扩增76一118株M、Gl及GZ片段2.2阳性克隆的酶切分析鉴定切胶回收目的片段克隆至pMD18一T载体，提取阳性克隆质粒DNA，根据VectorNTI6.0软件对M片段的酶切位点分析，结合pMD18一载体的物理图谱，应用不同的限制性内切....

图1一5重组杆状病毒的PCR鉴定

增出4330bp(2430+1700)和3830bp(2430+1400)左右的特异片段，整合了空质粒pFastBacHTb的克隆，则PCR将仅扩增出2430bp左右的片段，重组病毒构建模式图见图1一4。结果在PCR产物的核酸电泳图中的确出现了两条特异性扩增带，而且大小与预期相吻....

图1一8western一b1Ot检测目的蛋

博士学位论文汉滩病毒重组腺病毒疫苗的基础研究图1一7昆虫细胞表达蛋白检侧兔血清的ELISA结果注:(+)指检测阳性兔多抗，(一)检测正常兔2.5表达蛋白的Western一blot检测将重组杆状病毒vB一G1和vB一G2分别以MOI一5一10感染昆虫细胞Sfg，72h后细胞发生严重....

本文编号：3923230