两种延迟整流钾通道离子流相互作用的研究

发布时间：2017-05-28 10:11

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【摘要】：背景和目的： 延迟整流钾离子通道（如I_(Kr)和I_(Ks)）同一通道的不同亚基与不同通道间均存在相互作用。通过研究I_(Ks)通道内部亚基间不同比例组合的相互作用，比较KCNQ1/KCNE1电流与野生型的I_(Ks)电流的电生理特性。对比共转染的KCNQ1/KCNH2通道与野生型KCNQ1通道及KCNH2通道的电流特征，以进一步揭示心律失常的发病基础，为其临床用药提供理论依据。 第一部分磁珠标记法测定共转染后KCNQ1/KCNE1通道电流 方法： 利用免疫磁珠阳性标记法制作KCNQ1/KCNE1通道表达系统，测定通道电流的I-V曲线、稳态激活曲线和激活时间常数等，比较其与WT-KCNQ1通道电流的区别，探讨KCNQ1/KCNE1通道亚基间不同比例组合时的电流特性。 结果： 采用35mm平皿，2ug质粒，5ul lipofectamine转染试剂，在48-72h时细胞阳性率可达10~15%。记录KCNQ1/KCNE1通道电流，比较亚基间不同比例组合下电流密度，在比例达到1:3时达到高峰；稳态激活曲线与波尔兹曼方程良好拟合，V_(1/2)及斜率（k）均比WT-KCNQ1通道的值大；灭活时间常数Tau1和Tau2均较大，，灭火时间长；KCNQ1/KCNE1（1:3）通道的激活时间常数Tau值随着电压的增加而不断增大。 结论： 1.细胞最佳的转染配比为2ug质粒，5ul lipofectamine转染试剂，当KCNQ1:KCNE1比例为1:3时，此组合的电流与经典的Iks电流最接近。 2.所记录的KCNQ1/KCNE1通道（α：β=1:3）电流密度比WT-KCNQ1 通道大，说明KCNE1通道蛋白的表达量与I_(Ks)电流密度成正比。 3. KCNQ1/KCNE1通道门控动力学特性与WT-KCNQ1通道完全相反，却与经典的Iks电流一致，即表现出慢激活、慢灭火和基本上无失火的电流特征。 4.电流密度和门控动力学的改变与KCNQ1/KCNE1通道内部亚基间相互作用密不可分。 第二部分WT-KCNQ1/KCNH2通道的电生理特征的研究及比较 方法： 利用免疫磁珠阳性标记表达系统记录WT-KCNQ1/KCNH2通道电流，分别比较其与WT-KCNQ1通道及WT-KCNH2通道电流的区别，揭示不同延迟整流钾通道间的相互作用，及与心律失常的发生机制相关。 结果： KCNQ1/KCNH2通道在KCNQ1通道蛋白的作用下电流密度均明显增加，且在刺激电压20mV以上时出现明显的内向整流特性；当刺激电位为-40mV~+60mV系列脉冲刺激时，通道稳态激活曲线与波尔兹曼方程拟合效果良好，其V_(1/2)=-0.92331±2.22338mV，k=9.58502±2.03137mV；在20mV时激活时间常数Tau值开始迅速下降，这与其峰值电流的I-V曲线相吻合。 结论： 1. KCNQ1/KCNH2钾通道的电流密度比野生型的大，但未改变其内向整流特性。说明KCNQ1通道蛋白的协同作用，能明显改变KCNH2通道电流的曲线形状和峰值。 2. KCNQ1/KCNH2钾通道的稳态激活曲线与波尔兹曼方程拟合效果良好，灭火时间常数和激活时间常数明显较单独的野生型通道大。 3.共转染后通道的动力学改变说明钾通道的不同通道(IKs和I_(Kr))间电流存在相互作用、相互影响。
【关键词】：KCNQ1/KCNE1通道 KCNQ1/KCNH2通道 共转染 相互作用 心律失常
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分：IKs 通道内部亚基间不同比例相互作用的研究9-26
• 前言9
• 一、材料与方法9-13
• 二、结果13-24
• 三、讨论24-26
• 第二部分：两种延迟整流钾通道离子流相互作用的研究26-42
• 前言26
• 一、材料与方法26-30
• 二、结果30-40
• 三、讨论40-42
• 参考文献42-46
• 致谢46-47
• 综述：心脏钾通道各离子流间相互作用的研究进展47-53
• 参考文献51-53

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 李安,李东;心室肌动作电位的计算机建模与仿真[J];计算机仿真;2002年06期

2 李安,揭克敏;心室肌动作电位的计算机建模与仿真[J];南昌航空工业学院学报(自然科学版);2004年02期

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中国博士学位论文全文数据库 前2条

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中国硕士学位论文全文数据库 前1条

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本文编号：402433