IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响

发布时间：2017-06-02 09:22

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【摘要】：目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所;北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室;
【关键词】： IFN-λR TRAF NF-κB ISRE 相互作用
【分类号】：R346
【正文快照】： 学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室干扰素-λ(interferon-λ,IFN-λ)是2003年由Sheppard等[1]和Kotenko等[2]共同发现,属于Ⅲ型干扰素,包括:IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3,又称白细胞介素(interleukin,IL)-29、IL-28A和IL-28B。IFN-λ的受体由特

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本文编号：414797