微小核糖核酸-21抑制spry2影响jurkat细胞IL-10表达的研究

发布时间：2017-06-04 04:09

  本文关键词：微小核糖核酸-21抑制spry2影响jurkat细胞IL-10表达的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]通过研究微小核糖核酸(miRNA)-21调控spry2对surkat细胞IL-10、IL-2和TNF-α表达的影响,从而探讨miRNA-21在炎症反应中的作用机制。 【方法]将人T淋巴细胞系jurkat E6-1细胞分为人工合成的miRNA-21模拟物(Mimics)组和miRNA-21模拟物阴性对照(Mimics NC)组、miRNA-21抑制物(inhibitors)组和miRNA-21抑制物组阴性对照(inhibitors NC)组,使用无血清的RPMI1640把jurkat细胞的浓度调整为2×106/m1,各组转染物的终浓度为75nM,每组重复8次,对培养的jurkat细胞使用脂质体2000试剂进行细胞转染48小时后,离心收集各组jurkat细胞的上清液,并用PBS洗涤jurkat细胞后提取细胞总RNA和蛋白,使用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞的miRNA-21和spry2mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹技术(Western Blotting)检测各组spry2蛋白表达,同时用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平,并对IL-10的分泌与miRNA-21和spry2的表达进行直线相关性分析。 [结果]jurkat细胞转染48h后,与其阴性对照组比较,Mimics组miRNA-21的相对表达量和细胞上清液IL-10的分泌水平显著增加(P0.05), spry2mRNA的相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著减少(P0.05),细胞上清液TNF-α和IL-2的分泌水平无显著变化(P0.05)；与其阴性对照组比较,抑制物组miRNA-21的相对表达量和细胞上清液IL-10的分泌水平显著减少(P0.05),spry2mRNA相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著增加(P0.05),细胞上清液TNF-α和IL-2的分泌水平无显著变化(P0.05) IL-10的分泌水平与miRNA-21的表达量呈显著正相关(r=0.816,P0.01),IL-10的分泌水平与spry2蛋白的相对表达量呈显著负相关,(r=-0.762,P0.05)。 [结论]在jurkat细胞中,miRNA-21可能通过抑制其靶基因spry2的表达而促进抗炎性细胞因子IL-10的分泌,因此表明miRNA-21可能通过促进IL-10的表达而发挥潜在的保护作用。
【关键词】：微小核糖核酸-21 spry2 jurkat细胞 IL-10
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 术语和中英文对照4-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-14
• 材料和方法14-31
• 结果31-46
• 讨论46-49
• 结论49-50
• 参考文献50-56
• 综述56-75
• 参考文献67-75
• 致谢75-76
• 硕士研究生期间发表的论文76

【共引文献】

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本文编号：419958