慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

发布时间：2017-09-06 11:51

  本文关键词：慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

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【摘要】：目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80%-90%)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P0.01)。结论:pWPI-PON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应。
【作者单位】： 武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系;
【关键词】： 对氧磷酯酶 慢病毒载体 巨噬细胞 TNF-α
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:30770850,81270364)
【分类号】：R363.1
【正文快照】： 对氧磷酯酶(Paraoxonase,PON)是一类钙依赖性的催化水解磷酸酯键的芳香酯酶,因其常见底物为对氧磷而命名。其包括PON1、PON2和PON3三种亚型,其中PON1主要由肝脏合成分泌入血、高亲和结合于高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),是HDL发挥抗氧化及抗炎的主要成分[1]。大

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本文编号：802979