大鼠胚胎着床时支配子宫的植物性神经对β-catenin、Wnt-1表达的影响

发布时间：2017-09-06 17:41

  本文关键词：大鼠胚胎着床时支配子宫的植物性神经对β-catenin、Wnt-1表达的影响

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【摘要】：生殖活动是由神经、内分泌和免疫系统共同参与的过程,妊娠过程是一个复杂的生理过程,而一个成功的妊娠过程中胚胎着床是非常重要的,在着床窗口期胚囊经过附着、粘附、渗透和滋养层浸润来完成着床过程。这个过程是神经递质、内分泌激素、细胞因子和免疫细胞协同作用的结果。Wnt信号通路作为细胞信号传导系统之一与胚胎着床联系密切。但是有关植物性神经对胚胎着床过程中Wnt细胞信号传导调节影响的资料很少。因此,本试验目的就是观察支配子宫的植物性神经损毁或功能抑制处理是否影响着床期子宫内Wnt信号通路的关键分子β-连接蛋白(β-catenin)和Wnt-1的动态表达。 本试验通过手术和化学损毁方法去除或抑制支配大鼠子宫的植物性神经作用,观察大鼠着床情况；应用免疫组化法定位观察了不同处理组的大鼠在妊娠4d、5d、6d子宫中P-catenin和Wnt-1免疫阳性细胞的分布规律；应用实时荧光定量RT-PCR技术,分析β-catenin mRNA和Wnt-1mRNA的表达量的差异性。结果表明：(1)阻断支配子宫的植物性神经作用后,在妊娠5d并未看到着床点或其数量比较少,子宫腺上皮细胞发生不同程度的空泡和和核固缩现象影响了子宫腺的正常分泌,进而推迟了胚泡着床。(2)在妊娠4d-6d的大鼠子宫中,β-catenin免疫阳性细胞分布在腔上皮下边基质细胞的胞质中；Wnt-1免疫阳性细胞分布在基质细胞胞质、子宫腺上皮细胞胞质和胞膜以及子宫腔上皮细胞中偶有分布。在妊娠4d-6d子宫基质中的β-catenin和Wnt-1表达数量有所变化,且神经阻断后对其数量影响明显。正常妊娠4d中β-catenin和Wnt-1免疫阳性表达出现高峰,而在妊娠5d明显减少,妊娠6d又开始增加；交感神经和副交感神经全部阻断后,β-catenin和Wnt-1阳性基质细胞随着妊娠时间的变化呈现上升趋势,且较之正常组各阶段明显升高；阻断交感神经后,β-catenin和Wnt-1阳性基质细胞随妊娠时间的变化呈现上升趋势,但明显低于正常组各阶段的阳性表达；阻断副交感神经后,β-catenin和Wnt-1阳性基质细胞与正常组的变化趋势一致,但是在妊娠5d表达较正常5d明显增加。这些结果提示神经损毁后β-catenin和Wnt-1的表达量远远高于正常或表达量不足,通过这些变化而影响正常着床窗口期子宫内膜的正常发育,神经损毁后影响正常的表达分布,不能提供适宜的胚泡发育及着床的内环境,从而使胚泡着床延迟或着床数减少。我们通过qRT-PCR法mRNA的水平也发现了同样的变化规律,进一步验证了结果可靠。 总之,支配子宫的植物性神经损毁影响胚胎着床使胚胎着床延迟或着床数减少,妊娠早期子宫中的β-catenin及Wnt-1的表达异常可能是神经影响胚胎着床的重要机制之一。
【关键词】：植物性神经 Wnt/β-catenin信号通路 胚胎着床 β-catenin Wnt-1
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R321
【目录】：

• 符号说明4-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 前言12-31
• 1.1 子宫与植物性神经12-15
• 1.1.1 哺乳动物子宫的结构与功能12-15
• 1.1.2 子宫的植物性神经15
• 1.2 Wnt信号通路15-24
• 1.2.1 Wnt家族15-18
• 1.2.1.1 Wnt及其受体15-16
• 1.2.1.3 结肠腺瘤样息肉病蛋白16
• 1.2.1.4 轴蛋白16-17
• 1.2.1.5 糖原合成酶激酶3β17
• 1.2.1.6 T细胞转录因子/淋巴样增强因子17
• 1.2.1.7 下游靶基因17-18
• 1.2.2 非经典信号通路18
• 1.2.2.1 Wnt/Ca~(2+)通路18
• 1.2.2.2 Wnt/平面细胞极性通路(Wnt/PCP通路)18
• 1.2.3 经典信号通路(Wnt/β-catenin通路)18-19
• 1.2.3.1 经典信号通路组成18
• 1.2.3.2 通路反应18-19
• 1.2.4 Wnt信号通路与哺乳动物的生殖19-22
• 1.2.4.1 Wnt信号通路与生殖系统早期发育19-20
• 1.2.4.2 发情周期及妊娠中的Wnt信号通路20-22
• 1.2.5 Wnt信号通路与动物的胚胎发育及肿瘤发生22-24
• 1.2.5.1 早期胚胎发育与肿瘤发生的相似性22-23
• 1.2.5.2 Wnt信号通路在胚胎发育与肿瘤发生过程中的作用23-24
• 1.3 β-catenin的研究进展24-27
• 1.3.1 β-catenin的结构与功能24-25
• 1.3.2 β-catenin与胚胎发育及肿瘤发生25-27
• 1.4 Wnt-1的研究进展27-29
• 1.4.1 Wnt及Wnt-1的发现与功能27-28
• 1.4.2 Wnt-1与胚胎发育及肿瘤发生28-29
• 1.5 胚胎着床与子宫内膜容受性29-30
• 1.6 本研究的目的和意义30-31
• 2 材料与方法31-40
• 2.1 试验材料31-33
• 2.1.1 试验动物31-32
• 2.1.2 主要试剂和试验用品32-33
• 2.1.2.1 试验主要试剂及来源32
• 2.1.2.2 主要的试验仪器32-33
• 2.1.2.3 主要生物学数据库和相关生物学软件33
• 2.2 观察雌性大鼠发情规律变化33-34
• 2.3 交感神经损毁情况检测34
• 2.4 免疫组织化学方法检测子宫β-catenin和Wnt-1蛋白的阳性分布34-35
• 2.4.1 切片标本制备34
• 2.4.2 HE染色34-35
• 2.4.3 免疫组织化学方法的具体步骤35
• 2.4.4 免疫组织化学方法结果统计35
• 2.5 Western blot法测定大鼠子宫中β-catenin和Wnt-1蛋白的含量35-37
• 2.5.1 总蛋白的提取35-36
• 2.5.2 总蛋白的浓度测定36
• 2.5.3 考马斯亮蓝染色确定蛋白质上样量36
• 2.5.4 Western blot方法的具体步骤36-37
• 2.5.5 Western blot的结果统计37
• 2.6 实时荧光定量法测定β-catenin mRNA、Wnt-1 mRNA相对表达量37-40
• 2.6.1 总RNA的提取37
• 2.6.2 提取的总RNA质量鉴定37
• 2.6.3 引物设计及RT-PCR扩增37-40
• 2.6.3.1 引物的设计合成37-38
• 2.6.3.2 反转录反应38
• 2.6.3.3 PCR 反应38-39
• 2.6.3.4 RT-PCR产物的分析39
• 2.6.3.5 RT-PCR的条件优化39
• 2.6.3.6 RT-PCR数据的统计分析39-40
• 3 结果及分析40-56
• 3.1 不同剂量6-OHDA对支配子宫的交感神经损毁程度的观察结果40
• 3.2 神经损毁对子宫着床点和排卵点的影响40-41
• 3.3 神经损毁对子宫组织结构的影响41-43
• 3.4 β-catenin和Wnt-1免疫阳性细胞在子宫内的分布规律43-50
• 3.4.1 β-catenin免疫阳性细胞在子宫内的分布规律43-47
• 3.4.2 Wnt-1免疫阳性细胞在子宫内的分布规律47-50
• 3.5 β-catenin和Wnt-1表达的Western Blot分析50-53
• 3.6 β-catenin和Wnt-1表达的qRT-PCR检测53-56
• 3.6.1 熔解曲线分析53
• 3.6.2 总RNA及qRT-PCR产物验证53-54
• 3.6.3 β-catenin和Wnt-1 mRNA表达的变化54-56
• 4 讨论56-60
• 4.1 植物性神经损毁对子宫腺体的影响56
• 4.2 植物性神经损毁对子宫中β-catenin和Wnt-1的影响56-58
• 4.3 6-羟多巴胺最佳剂量确定58-60
• 5 结论60-61
• 参考文献61-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 苏姗;阚艳艳;田永杰;;sFRP-1、Wnt-1在宫颈癌及癌前病变中的表达及意义[J];山东大学学报(医学版);2010年01期

2 孙晓阳,王雁玲;Wnt信号通路与哺乳动物生殖[J];生物化学与生物物理进展;2003年02期

3 韩萍萍;郑若男;;Wnt信号通路及其与疾病的关系[J];生物技术通报;2009年11期

4 靳文剑;陈火国;钟礼瀑;汪凌玲;张q和;;β-catenin的表达与胃癌临床病理特征的关系[J];实用癌症杂志;2006年04期

5 李东辉;李明众;张薛榜;;β-catenin和Ki-67在人宫颈癌组织中的表达及其意义[J];实用癌症杂志;2007年01期

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本文编号：804531