抗人B7-1及B7-2双特异性抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

发布时间：2017-09-07 06:26

  本文关键词：抗人B7-1及B7-2双特异性抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

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【摘要】：目的:构建及表达抗人B7-1及B7-2双特异性抗体(anti-B7-1/B7-2-Bs Ab),并分析其与相应抗原结合的特性。方法:采用PCR的方法分别从重组质粒中克隆出抗人B7-1及B7-2单链抗体基因,将其克隆入p IRES2-EGFP表达载体,并用6×His为纯化的标签。用脂质体法将两个基因转染入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),经G418加压筛选高表达株,扩大培养并收集上清纯化。分析抗体对膜型B7-1及B7-2的识别及与其相应抗原的结合能力。以天然高表达B7-1及B7-2分子的Raji细胞用丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC为效应细胞,分析抗体通过阻断B7-CD28共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:获得了稳定表达抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株及相应的抗体。该抗体与B7-1及B7-2基因转染细胞株L929-B7-1及L929-B7-2的阳性结合率分别为99.5%及62.0%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab对抗人B7-1及B7-2单链抗体的竞争结合率分别为0.4%及32.4%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab通过阻断B7-CD28共刺激信号使PBMC的增殖效应仅为阴性对照组的59.7%。结论:成功构建了稳定分泌抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株(命名为SA-VI)。该抗体可以识别B7-1及B7-2分子并具有良好的生物学活性。
【作者单位】： 苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系;
【关键词】： B- B- 双特异性抗体 CHO 共表达
【基金】：国家自然科学基金(No.81373236)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： B7-1(又称CD80)及B7-2(又称CD86)是表达子,同属B7家族,其相对应的受体是表达在T细胞在抗原递呈细胞(APC)表面的重要的协同刺激分表面的CD28家族分子[1,2]。B7-1与B7-2分子在不 同的时相与T细胞相互作用产生共刺激信号。由的TAG序列)以上引物由金斯瑞生物科技公司于B7-2的表达

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本文编号：807932