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let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响

发布时间:2017-09-09 12:17

  本文关键词:let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响


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【摘要】:目的研究let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响。方法生物信息学分析let-7e的靶基因并通过荧光素酶报告实验进行验证;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代单核细胞24、48和72 h后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度,筛选出LPS最佳刺激时间和质量浓度;用let-7e mimic或阴性对照(NC)瞬时转染PBMCs和原代单核细胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;转染细胞经LPS刺激后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度。结果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激细胞24 h即可产生较高水平的IL-10;瞬转let-7e mimic 24 h即可使细胞高表达let-7e;let-7e mimic组细胞培养上清中IL-10的质量浓度低于let-7e NC组。结论 let-7e可抑制PBMCs和原代单核细胞产生IL-10。
【作者单位】: 中山大学附属第一医院广东省器官捐献与移植免疫重点实验室;中山医学院免疫学研究所;
【关键词】let-e IL- LPS 炎症
【基金】:国家自然科学基金(30872350,31370870) 广东省自然科学基金(S2012010009050,S2013020013000,S81510008901000017) 广东省科技计划(2010B050700008,2011B040300022,2013A020229003) 广州市科技计划(11C32060749,2011J4100084,2008Z1-E221) 2010年中山大学高校基本科研业务费青年培育项目(10ykpy31) 广东省器官捐献与移植免疫重点实验室建设项目(2013A061401007)
【分类号】:R392
【正文快照】: 1材料与方法 1.8实时荧光定量PCR法(q RT-PCR) 根据制造商的使用说明使用TRIzol试剂提取总RNA,逆转录后进行q RT-PCR检测let-7e的表达量。 PCR扩增条件为:95 ℃预变性30 s,然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s进行40个循环。 每个样重复3次。 融解曲线分析:温度65~95 ℃。 以U6作为内

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本文编号:820390


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