日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因功能的初步研究

发布时间：2017-09-11 20:40

  本文关键词：日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因功能的初步研究

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【摘要】：目的探索日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白(chymotrypsin-like protease)在终宿主体内的基因表达、定位和潜在功能,评估该蛋白在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护力。方法利用软件分析日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白(Sj CTRL)基因(Gen Bank登录号为FN317561.1)的理化特性,及与其他物种同源基因的种系发生关系。采用整体原位杂交法定位Sj CTRL基因转录本在d26成虫中的表达部位。利用实时定量荧光PCR方法监测感染后14、18、22和26 d等4个发育时期雌雄虫的Sj CTRL基因转录水平。制备Sj CTRL-ds RNA,采用体外浸泡法对d26合抱雌雄虫进行RNA干扰,并利用共聚焦显微镜观察被干扰虫体的形态学变化。设计特异性引物扩增去除跨膜结构的编码基因序列,并克隆至p ET-28a原核表达载体,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后进行原核表达。将纯化重组蛋白免疫C57BL/6小鼠,用尾蚴(40±2条/鼠)攻击感染进行动物保护性实验。同时设对照组。感染后35 d收集虫体和肝脏,统计减虫率、每克肝组织减卵率。结果原位杂交定位结果显示,该基因转录本位于雌虫后段肠道。Sj CTRL基因仅在d26雌虫体内有较高的转录本丰度。Sj CTRL-ds RNA干扰后雌虫相应基因转录本的相对表达量降至25.7%(P0.05),但未有可观察到的形态学变化。构建了p ET-28a/Sj CTRL重组质粒,诱导表达获得不可溶重组蛋白。免疫保护试验结果显示,减虫率为25.4%,减卵率为80.5%。结论初步探明日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因仅在d26雌虫的后段肠道高转录,体外干扰可降低Sj CTRL基因的转录本水平,该蛋白可一定程度上减少感染日本血吸虫的C57BL/6小鼠的成虫数和肝脏虫卵数。
【作者单位】： 复旦大学生命科学学院;中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所;
【关键词】： 日本血吸虫 胰凝乳蛋白酶样蛋白 原位杂交 RNA干扰 免疫保护
【基金】：国家自然科学基金(No.81271867)~~
【分类号】：R383.24
【正文快照】： (1 School of Life Science,Fudan University,Shanghai 200433,China;2 National Institute of ParasitcDiseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Shanghai 200025,China)蛋白水解酶是血吸虫在脊椎动物体内寄生的关键蛋白,参与了血吸虫尾蚴侵染宿主以及

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本文编号：832967