鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选

发布时间：2017-09-12 15:46

  本文关键词：鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选

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【摘要】：目的:构建鼠源E型肉毒毒素(BoNT/E)免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体。方法:从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG_1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M_(13)K_(07)的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定。结果:鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×10~7,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85%,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。结论:构建了库容量达7.09×10~7的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 噬菌体展示 E型肉毒毒素 抗体库 单链抗体
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 肉毒毒素是由肉毒梭菌产生的一种细菌外毒 素。根据抗原性的不同,肉毒毒素分为A~G共7个血清型,其中A、B、E和极少数F型主要引发以人迟缓性神经麻痹为特征的肉毒中毒“1。肉毒毒素是目前所知生物毒素中毒性最强的物质。虽然肉毒中毒 的发病率低,但死亡率高,特别是肉毒毒素可

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本文编号：838122