一种简便、可靠的免疫组化双重标记新方法

发布时间：2017-09-13 07:36

本文关键词：一种简便、可靠的免疫组化双重标记新方法

【摘要】：目的探索一种简便可靠、清晰的免疫组化双重标记方法 ,可用普通光学显微镜观察,并能长期保存染色结果。方法免疫组化双标中,均使用辣根过氧化物酶(HRP)连接的二抗,底物分别选用二氨基联苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB)和镍增强DAB。第一标DAB染色完成后切片煮沸4~5 min以灭活HRP,完全阻断交叉反应,然后进行第二标镍增强DAB染色。结果 1切片煮沸5 min,可完全灭活残余的HRP酶活性,防止染色反应交叉;5%的H2O2灭活HRP酶不完全,易产生交叉反应;短暂高温灭活HRP不损坏之前的特异性DAB染色或造成组织损伤。2第一标DAB的棕黄色与第二标镍增强DAB的紫蓝色反差大、背景低;颠倒底物使用次序将损害双标质量。此外,双标切片可采用传统的中性树胶封片,染色结果能恒久保存。结论采用同一种酶标记系统建立了简便、可靠的免疫组化双标新方法。该方法标记结果清晰、操作简便、试剂易得,有较大应用价值。
【作者单位】：盐城卫生职业技术学院神经退行性疾病与修复实验室;
【关键词】： 免疫组化 辣根过氧化物酶 二氨基联苯胺 镍方法 双重标记 交叉反应
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30470594,30772282)
【分类号】：R392
【正文快照】： 在基础和临床病理形态学研究中,免疫组织化学染色是一种很常用的技术。在同一张组织切片上免疫组织化学双重标记(免疫组化双标)可以了解两种抗原分子之间不同的组织细胞分布,以分析两者相互关系[1];其结果对比直观,信息量远比传统单染高,并可克服由于切片间各种差异而引起的时

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