LL-37基因转染对巨噬细胞活化及信号转导分子表达的影响

发布时间：2017-09-13 11:14

  本文关键词：LL-37基因转染对巨噬细胞活化及信号转导分子表达的影响

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【摘要】：人源阳离子抗菌肽hCAP-18/LL-37作为天然免疫的效应分子，不仅具有广谱的抗感染作用，还具有趋化、中和内毒素、促血管生成素等多种生物学效应。近年来研究证实抗菌肽LL-37具有强大的固有免疫调节功能，并可以通过调节巨噬细胞和树突状细胞的活化参与获得性免疫应答。巨噬细胞是人体免疫系统的重要细胞，在机体天然免疫与适应性免疫中都发挥着重要作用。文献报道LL-37可在上皮细胞、肺泡巨噬细胞呈诱导性表达。然而LL-37在巨噬细胞的表达与活化及其机制研究尚不十分清楚。 本研究通过建立稳定表达LL-37的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型，研究LL-37基因对巨噬细胞活化功能的影响及活化的相关分子机制。为LL-37的临床应用奠定实验基础。 1建立稳定表达LL-37基因的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型 扩增真核表达质粒pEGFP-C1-LL-37，，经转染、筛选和鉴定，得到稳定表达pEGFP-C1-LL-37质粒的RAW264.7细胞（C1LR）以及稳定表达pEGFP-C1质粒的RAW264.7细胞(C1R)，为进一步实验奠定基础。 2LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响 采用MTT法检测细胞增殖活性；荧光微球吞噬实验测定吞噬功能；NO检测试剂盒检测NO分泌水平。结果表明：C1LR细胞组与细胞对照组及C1R细胞组比较细胞增殖能力明显增强；吞噬功能增强；NO分泌水平明显增多。 3LPS可以促进LL-37基因对小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化。 采用LPS刺激RAW264.7、C1LR、C1R细胞，采用上述方法进行活性测定，结果显示，经LPS刺激后，C1LR细胞较C1R细胞及未经LPS刺激C1LR细胞组比较增殖能力明显增强；NO分泌水平明显增多；吞噬功能有所提高。 4LL-37基因对RAW264.7细胞LPS-TLR4介导的信号通路的影响 探讨LL-37基因对RAW264.7细胞活化是否通过LPS-TLR4信号通路介导。采用RT-PCR法检测TLR4的表达，结果显示，经过LPS刺激的C1LR细胞TLR4mRNA表达上调。继而，检测了LPS-TLR4信号通路中关键接头蛋白分子及下游炎性因子的mRNA表达变化情况。结果发现，经LPS处理后，C1LR细胞上MyD88、TRAF-6的mRNA表达上调，并且NF-κB表达转录入核。TNF-α、IL-1β的mRNA表达上调。 本研究结果提示：LL-37基因可以促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化；LL-37基因可以通过LPS-TLR4介导的信号转导通路参与活化巨噬细胞。为抗菌肽在巨噬细胞介导的免疫调节及其作用机制与临床应用方面研究奠定了实验基础并提供了新的科研资料。
【关键词】：LL-37 基因转染 RAW264.7细胞 TLR4 NF-κB
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 提要4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-14
• 引言14-15
• 文献综述15-24
• 1 LL-37 的发现和免疫生物学功能15-20
• 1.1 LL-37 的发现与结构及表达15-17
• 1.2 LL-37 的免疫生物学效应17-20
• 2 巨噬细胞的活化类型及功能20-21
• 2.1 巨噬细胞的活化类型20
• 2.2 巨噬细胞的主要生物学功能20-21
• 3 TLR4 及其信号转导通路途径21-24
• 3.1 Toll 样受体及其表达21-22
• 3.2 TLR4 及其信号转导通路22-23
• 3.3 Toll 样受体与 LL-3723-24
• 课题设计思路24-26
• 实验研究26-56
• 1 材料和方法26-38
• 1.1 细胞株26
• 1.2 质粒26
• 1.3 主要试剂26-27
• 1.4 主要试剂的配制27-29
• 1.5 主要实验仪器29-30
• 1.6 实验方法30-38
• 2 结果38-52
• 2.1 建立稳定表达 LL-37 基因的 RAW264.7 细胞系38-43
• 2.2 LL-37 基因对 RAW264.7 细胞系活化功能的影响43-45
• 2.3 LPS 对稳定表达 LL-37 的 RAW264.7 细胞活化功能的影响45-48
• 2.4 LL-37 基因对 RAW264.7 细胞 LPS-TLR4 信号通路及其下游信号分子的表达影响48-52
• 3 讨论52-55
• 3.1 LL-37 基因对巨噬细胞活化的影响53-54
• 3.2 LL-37 基因对 LPS-TLR4 介导的巨噬细胞活化及下游信号分子的表达变化的影响54-55
• 4 结论55-56
• 参考文献56-64
• 致谢64

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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8 周q

本文编号：843365