小鼠CLP脓毒症模型的建立及抗菌肽Lycosin-1对其肝肾功能的影响

发布时间：2017-09-14 05:11

  本文关键词：小鼠CLP脓毒症模型的建立及抗菌肽Lycosin-1对其肝肾功能的影响

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【摘要】：目的 脓毒症(sepsis)是由细菌、真菌、病毒等各种感染因素导致的全身炎症反应综合征,病情加重可发展为多器官功能衰竭及脓毒症休克。炎症反应过度激活及免疫调节紊乱在脓毒症发生发展中起重要作用。盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture, CLP)法可引起腹腔混合细菌感染,诱发急性腹膜炎导致脓毒症。利用CLP法制作的脓毒症模型被广泛用于脓毒症病理生理机制及药物治疗等研究。抗菌肽Lycosin-1(Lyc)是从狼蛛singorensis中提取的阳离子抗菌肽,具有广谱抗菌作用。近年来,许多研究发现抗菌肽对CLP脓毒症模型有抗菌作用,但抗菌肽在抗菌的同时是否对机体的肝肾功能产生不良影响,目前相关研究报道较少。本研究旨在通过动物实验研究探讨抗菌肽Lycosin-1对正常Balb/c小鼠及脓毒症模型小鼠的肝肾功能影响。 方法 本研究分三部分：首先采用盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)法制作小鼠脓毒症模型,改变盲肠结扎长度、穿刺针大小及穿孔次数,以获得中重度脓毒症动物模型,即72h小鼠死亡率达70-100%。第二部分为腹腔注射不同浓度Lyc对正常小鼠肝肾急性毒性(6h、12h、24h)的研究,分为5个浓度亚组,即25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、500ug/ml组,各组每个时间点5只。观察24h内各组小鼠死亡情况及一般活动状况,并在相应时间点取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)等生化指标的变化。第三部分为探讨腹腔注射Lyc(200ug/ml)对CLP脓毒症模型小鼠的肝脏和肾脏是否有保护作用,分为Lyc干预6h组、12h组、24h组,各组再分为4个小组：①Sham组(假手术组)：打开小鼠腹腔找到盲肠,不结扎及穿孔,关闭腹腔后腹腔注射0.5ml生理盐水；②Sham+Lyc:不结扎及穿孔盲肠,关闭腹腔时注射Lyc (200ug/ml)0.5ml:③CLP组：见实验一中C组CLP模型制备方法,即在距盲肠末端1cm处结扎,并用12号针头贯穿盲肠穿孔2次。腹腔注射0.5m1生理盐水液体复苏；④CLP+Lyc见实验一中的C组CLP模型制备方法,术后立即腹腔注射Lyc(200ug/ml)0.5ml,每小组各10只小鼠。同样检测各组小鼠血清肝肾代谢指标的变化。 结果 1.采用距盲肠末端1cm处结扎,12号针头贯穿盲肠穿孔2次的方法制备的CLP模型小鼠72h死亡率达70-100%,且具有典型脓毒症表现,死亡小鼠解剖证实腹腔存在恶臭积液、部分肠管粘连。 2.不同浓度Lycosin-1腹腔注射24h内均无小鼠死亡,与对照组比较,虽然给药组的一些指标稍偏高或偏低,但差异无显著性(P0.05),且无剂量依赖性； 3.与假手术组比较,CLP脓毒症小鼠血清ALT、AST、BUN、SCr4个指标在术后6h、12h、24h三个时间点均升高,差别有统计学意义(P0.05)；Lyc干预组各时间点血清ALT、AST、BUN、SCr浓度与CLP组比较并没有降低,反而升高更显著,差异有统计学意义(P0.05)。 结论 1.采用盲肠结扎穿孔法成功制作了中重度脓毒症模型。 2.腹腔注射Lyc对正常小鼠的肝肾功能无急性毒副作用,但对脓毒症所致的小鼠肝肾损伤无保护作用,甚至可能存在毒副作用。
【关键词】：盲肠结扎穿孔法 脓毒症 抗菌肽 Lycosin-1 肝肾功能
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7;R-332
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 目录10-11
• 缩略词表11-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 小鼠CLP脓毒症模型的建立及抗菌肽LYCOSIN-1对其肝肾功能的影响14-24
• 第一部分 建立小鼠CLP脓毒症模型14-16
• 1 材料14
• 2 实验方法14-15
• 3 实验结果15-16
• 第二部分 抗菌肽Lycosin-1对正常Balb/c小鼠的肝肾功能影响16-19
• 1 材料16-17
• 2 实验步骤17
• 3 结果17-19
• 第三部分 抗菌肽Lycosin-1对CLP脓毒症模型小鼠的肝肾功能影响19-24
• 1 材料19
• 2 实验步骤19-20
• 3 结果20-24
• 第三章 讨论24-28
• 1 CLP脓毒症模型的建立24
• 2 抗菌肽Lycosin-1对CLP模型小鼠肝肾功能影响24-28
• 第四章 结论28-29
• 参考文献29-32
• 综述32-48
• 参考文献41-48
• 致谢48

【共引文献】

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本文编号：848065