构建及选育新型结核病疫苗菌株的实验研究

发布时间：2017-09-15 11:32

  本文关键词：构建及选育新型结核病疫苗菌株的实验研究

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【摘要】：目的：以卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin vaccine, BCG）菌株(简称BCG菌株）和结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(简称H37Ra菌株）为亲本菌株，制备BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体的融合菌株，并对融合菌株进行鉴定、培养。 方法： 1.利用原生质体技术制备BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体，并对制备影响因素中菌龄、酶解浓度、酶解时间进行探索，优化BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体的制备条件。 2.采用三种不同的的再生培养基分别为再生罗氏固体培养基、再生Sauton固体培养基和再生Sauton液体培养基，对BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体分别进行再生培养，优化其再生条件。 3.采用荧光染色技术分别标记及鉴定BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体。 4.利用电穿孔技术对已标记的BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体进行电融合，制备融合菌株并优化制备融合菌株的条件。 5.利用激光共聚焦显微镜对电融合后的融合菌株进行观察、鉴定并对融合菌株进行再生培养。 结果： 1.利用原生质体技术成功制备了BCG菌株原生质体，在菌龄为18d、酶解浓度为12mg/mL、酶解时间为5h时，是制备BCG原生质体的最优条件；制备H37Ra菌株原生质体的最佳条件：菌龄为21d，酶解浓度为12mg/mL、酶解时间为6h。 2.采用再生罗氏固体培养基、再生Sauton固体培养基和再生Sauton液体培养基分别培养BCG菌株原生质和H37Ra菌株原生质体，发现BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体在再生罗氏固体培养基和再生Sauton固体培养基上生长良好，而在再生Sauton液体培养基上几乎不生长。 3.采用荧光染色技术分别标记BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体：使用FDA染色标记BCG菌株原生质体，发现有活性的BCG菌株原生质体呈黄绿色荧光；使用罗丹明B染色标记H37Ra菌株原生质体，发现有活性的H37Ra菌株原生质体呈红色荧光。 4.利用电穿孔技术对荧光标记的BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体进行电融合，最佳的融合条件：融合电压U=2.2KV，电击时间t=0.8ms，，同时利用激光共聚焦显微镜可观察到融合效率高、活性好，具有红绿色荧光的BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体的融合菌株。 5.采用再生罗氏固体培养基对BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体进行再生培养，得到活性好、生长良好的融合菌株。 结论： 1.利用原生质体技术，制备出BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体，并对制备条件进行优化，同时对BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体的再生条件进行优化，培养出活性好、生长良好的再生菌株。 2.利用电穿孔技术，成功获得BCG菌株原生质体和H37Ra菌株原生质体的融合菌株；并对融合菌株进行再生培养，可得到生长良好的再生菌株。
【关键词】：原生质体融合 电融合 BCG菌株 H37Ra菌株 融合菌株
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-33
• 讨论33-37
• 结论37-38
• 参考文献38-41
• 文献综述41-52
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 作者简历53-54
• 导师评阅表54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：856271