DANCE与细胞代谢模式改变的关系

发布时间：2017-09-16 05:14

  本文关键词：DANCE与细胞代谢模式改变的关系

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【摘要】：目的： 在细胞、mRNA、蛋白的水平上研究不同胞内密度细胞的代谢变化，进一步探讨细胞代谢模式改变与DANCE（Density Alteration in Non-physiological Cells）的关系。 方法： 1. K562细胞分为对照组和0.1%VA（维甲酸）实验组，37℃培养48h，进行非连续蔗糖密度梯度离心（Discontinuous Sucrose Gradient Centrifugation,DSGC），分离细胞各条带。 2. Annexin V-PI双染法检测K562细胞中的S60、S50（正常组）、S50、S40（VA组）四条带细胞的凋亡情况。 3.高通量测序检测S50、S40（VA组）细胞中基因组mRNA的表达水平。 4.通过Real-time PCR、Western Blot检测不同条带K562细胞的mRNA和蛋白表达差异。 5.应用淋巴细胞分离液分离并制备糖尿病人外周血白细胞，再经DSGC分离得到S60、S50两条带白细胞。 6. PCR和Western Blot检测不同条带白细胞（糖尿病）的mRNA和蛋白表达差异。 结果： 1.对照组K562细胞经DSGC分离得到S60和S50两条带，0.1%VA处理的实验组则分离得到S50和S40两条带。 2.对照组的S60和S50以及VA实验组的S50和S40四条带的细胞经流式分析发现，细胞坏死的比例依次增加，，以实验组S40条带细胞的最高。 3. VA实验组S50与S40两条带细胞的基因表达谱具有显著性差异。与S50相比，S40的细胞有62个基因的mRNA表达显著上调，另有19个基因的mRNA表达显著下调。 4. Real-time PCR和Western Blot检测部分与细胞凋亡和DNA修复相关基因的mRNA和蛋白水平，我们发现VA实验组的S50与S40两条带细胞的mRNA及蛋白水平具有显著差异，该结果与高通量基因表达谱分析的结果一致。 5. DSGC分离糖尿病人外周血白细胞得到的S60和S50两条带细胞经PCR和Western Blot分析，发现炎症相关因子CD36和IL-6两个基因的表达水平具有显著差异，CD36在S50白细胞中的水平显著高于S60细胞，但IL-6在S60白细胞中的水平则显著高于S50细胞。 结论： K562细胞和糖尿病人外周血白细胞的DANCE反应伴随着细胞中基因表达谱的改变，提示细胞的DANCE反应与细胞的代谢改变密切相关。
【关键词】：DANCE DSGC K562 白细胞 基因表达谱
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 绪论9-16
• 实验材料与方法16-31
• 1 细胞株16
• 2 试剂及耗材16-17
• 3 仪器17-18
• 4 试剂配制18-21
• 5 引物序列21-22
• 6 实验方法22-31
• 6.1 K562 细胞复苏与培养22
• 6.2 K562 细胞的 DSGC 分离22-23
• 6.3 Annexin V/PI 双染检测各条带 K562 细胞凋亡情况23
• 6.4 高通量测序检测 K562 细胞 S50、S40（VA 组）细胞中各基因的 mRNA 表达水平23-24
• 6.5 Real-time PCR 检测 S50、S40（VA 组）两类 K562 细胞样品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表达水平24-26
• 6.6 Western Blot 检测 S60、S50（正常组），S50、S40（VA 组）四类 K562 细胞样品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表达水平26-27
• 6.7 人外周血白细胞的分离27-28
• 6.8 人外周血白细胞的 DSGC 分离28
• 6.9 PCR 检测 S60、S50 两类白细胞样品中 CD36 和 IL-6 的表达水平28-29
• 6.10 Western Blot 检测 S60、S50 两类白细胞样品中 CD36 和 IL-6 表达水平29-30
• 6.11 统计学处理30-31
• 实验结果与分析31-43
• 1 K562 细胞的 DSGC 分离31-32
• 1.1 K562 细胞 DSGC 分离结果31
• 1.2 K562 细胞 DSGC 分离结果分析31-32
• 2 K562 细胞 S50、S60（正常组），S40、S50（VA 组）条带细胞凋亡测定32-33
• 2.1 K562 细胞流式结果32-33
• 2.2 K562 细胞流式结果分析33
• 3 高通量测序检测 S40、S50（VA 组）细胞中各基因的 mRNA 表达水平33-38
• 3.1 K562 细胞高通量测序结果33-35
• 3.2 VA 处理的 K562 细胞 S40 和 S50 条带代谢差异分析35-38
• 4 Real-time PCR、Western Blot 检测 S50 与 S40（VA 组）部分基因与蛋白38-40
• 4.1 K562 细胞 Real-time PCR 检测结果38
• 4.2 K562 细胞 Real-time PCR 检测结果分析38-39
• 4.3 K562 细胞 Western Blot 检测结果39
• 4.4 K562 细胞 Western Blot 检测结果分析39-40
• 5 RT-PCR、Western Blot 检测不同条带白细胞的 mRNA 和蛋白表达差异40-43
• 5.1 人外周血白细胞 DSGC 分离结果40-41
• 5.2 人外周血白细胞 RT-PCR 检测结果41
• 5.3 人外周血白细胞 Western Blot 检测结果41
• 5.4 人外周血白细胞实验结果分析41-43
• 讨论43-46
• 全文结论46-47
• 不足与展望47-48
• 参考文献48-51
• 英文缩略词（Abbreviation）51-52
• 致谢52

【参考文献】

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本文编号：861075