同型半胱氨酸通过干扰胆固醇逆向转运促进巨噬细胞泡沫化

发布时间：2017-09-16 22:07

  本文关键词：同型半胱氨酸通过干扰胆固醇逆向转运促进巨噬细胞泡沫化

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【摘要】：目的阐明不同浓度同型半胱氨酸对THP-1源性巨噬细胞泡沫化的影响;探讨LXRα在同型半胱氨酸引起脂代谢紊乱中的作用。方法以THP-1单核细胞作为研究对象,培养THP-1单核细胞,取对数增殖期细胞进行后续试验,先后与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,成功复制试验用泡沫细胞模型,然后分别加入0、50、100、200μmol/L的Hcy,各组细胞培养24小时,其中0组为对照组(不加入Hcy)。利用油红O染色(Oil Red O,ORO)检测泡沫细胞内中性脂滴蓄积情况。利用酶终点法定量测定细胞内总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、游离胆固醇(Free Cholesterol,FC)、胆固醇酯(Cholesterol Ester,CE)的含量,观察不同浓度Hcy对泡沫细胞内脂质含量的影响。利用免疫细胞化学检测泡沫细胞LXRα蛋白表达,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)测定LXRαm RNA表达,观察不同浓度hcy对泡沫细胞LXRα表达的影响。结果与对照组相比较,随着Hcy浓度的增加,ORO染色结果显示,Hcy呈剂量依赖性地促进了巨噬细胞内胆固醇的聚集。实验组(hcy50、100、200μmol/L)泡沫细胞计数阳性百分率均较对照组升高(P0.05),其中以Hcy 100μmol/L组升高明显。在不同浓度Hcy干预下,泡沫细胞内TC、FC及CE含量均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。免疫细胞化学结果显示,实验组LXRα蛋白表达均低于对照组(P0.05),其中以Hcy 100μmol/L组降低最为明显。RT-PCR结果显示,与对照组相比较,实验组LXRαm RNA表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论同型半胱氨酸能够引起THP-1源性巨噬细胞泡沫化程度增加,使LXRαm RNA低表达导致胆固醇逆向转运障碍是其引起脂代谢紊乱的可能机制之一。
【关键词】：同型半胱氨酸 巨噬细胞 泡沫细胞 胆固醇逆向转运 肝核受体α
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 中英文缩略词表7-11
• 前言11-15
• 材料与方法15-27
• 1.材料15-19
• 1.1 细胞株15
• 1.2 主要试剂15-16
• 1.3 主要仪器16-17
• 1.4 试剂的配制17-19
• 2.方法19-27
• 2.1 THP-1 单核细胞的复苏、培养、换液、传代及冻存19-20
• 2.2 细胞模型的制备20
• 2.3 实验分组20-21
• 2.4 油红O染色对细胞进行定性分析21
• 2.5 酶终点法对总胆固醇（TC）和游离胆固醇（FC）测定进行定量分析21-22
• 2.6 细胞免疫组织化学检测LXRα 表达22-23
• 2.7 荧光定量PCR测定LXRα 基因mRNA表达23-26
• 2.8 统计学方法26-27
• 结果27-30
• 1.THP-1 单核细胞源性巨噬细胞27
• 2.泡沫细胞的定性及定量分析27-28
• 2.1 图3为不同Hcy浓度组细胞油红染色，从图中可以发现各组细胞中脂肪滴被染成橘红色，，核呈蓝色27
• 2.2 不同Hcy浓度组之间TC, FC, CE和CEE之间的比较27-28
• 3. 不同浓度 Hcy 对巨噬细胞中 LXRα 蛋白表达的影响28
• 4. 不同浓度Hcy干预后，各组细胞中LXRαmRNA表达情况28-30
• 结论30-31
• 附图31-34
• 图 1 THP-1 单核细胞×20031
• 图 2 THP-1 单核细胞源性巨噬细胞×40031
• 图3 不同浓度Hcy干预组细胞油红O染色，油镜31-32
• 图4 不同浓度Hcy干预组细胞油红细胞染色阳性率比较32
• 图5 不同浓度Hcy干预组细胞中LXRα 蛋白表达免疫组化×20032-33
• 图6 不同浓度Hcy干预对细胞中LXRαmRNA表达的影响33-34
• 讨论34-38
• 参考文献38-41
• 文献综述41-48
• 一、LXR与PPAR交互作用41-42
• 二、LXR与饮食胆固醇吸收42
• 三、LXR与胆固醇逆向转运（Reverse Cholesterol Transport, RCT）42-43
• 四、LXR与胆汁酸43-44
• 五、LXR与脂肪酸44
• 六、结语44-45
• 综述参考文献45-48
• 致谢48-49
• 攻读学位期间发表的学术论文49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘守钾;杨智承;刘苑;谭毓治;;动脉粥样硬化中单核细胞招募与泡沫细胞形成[J];中国动脉硬化杂志;2009年11期

2 丛广志;贾绍斌;陈大鹏;罗彩琴;;高同型半胱氨酸血症对主动脉组织Bcl-2基因甲基化影响[J];临床心血管病杂志;2012年04期

3 姜怡邓;马琳娜;孙炜炜;王菊;梁宇;;LDLR DNA甲基化在Hcy致泡沫细胞形成中作用机制的研究[J];宁夏医科大学学报;2011年08期

本文编号：865690